IL-17A对肺纤维化大鼠肺组织炎症的调控探究.pdf

目 录 1 IL-17A 对肺纤维化大鼠肺组织炎症的调控研究……………1 1.1 中文摘要………………………………………………………1 1.2 英文摘要………………………………………………………4 1.3 前言……………………………………………………………7 1.4 材料与方法……………………………………………………10 1.5 结果……………………………………………………………20 1.6 讨论……………………………………………………………34 1.7 结论……………………………………………………………40 1.8 参考文献………………………………………………………41 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………47 2 致谢……………………………………………………………48 3 肺纤维化中IL-17A 的研究进展（综述） …………………49 IL-17A 对肺纤维化大鼠肺组织炎症的调控研究 摘 要 目的：通过观察经博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺组织和肺泡巨噬细 胞（Alveolar macrophage ，AM ）中IL-17A 的表达，探讨IL-17A 在肺纤维 化发病机制中的作用和意义。方法：1.取 20 只Wistar 雌性大鼠（体重为 180~200g ）随机分为生理盐水对照组（NS 组）和博莱霉素致肺纤维化模型 实验组（BLM 组），每组10 只；2.BLM 组：气管内一次性注入经生理盐 水稀释的博莱霉素溶液0.2ml （5mg/kg 体重，BLM 溶液浓度为5mg/ml ）， 用以诱导大鼠复制肺纤维化模型；NS 组：气管内一次性注入0.2ml 生理盐 水 （1ml ／kg 体重）；3.然后各组分别于气管内灌注后第7 天和第28 天各 随机处死大鼠5 只，无菌操作下行支气管肺泡灌洗，回收支气管肺泡灌洗 液（Bronchial Alveolar Lavage Fluid ，BALF ），取出肺组织，病理学方法 观察各阶段肺内炎症和纤维化程度，免疫组化检测肺组织IL-17A 表达。收 集BALF 分为两组，一组用作细胞总、分数测定，以及用酶联免疫吸附实 验法（ELISA 法）测定BALF 中TNF-、IL-17A 的含量；一组用作AM 的 分离与纯化、培养，培养上清液用ELISA 法测定IL-17A 的含量，提取AM 总RNA 后用逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction ，RT-PCR ）测定肺泡巨噬细胞IL-17A 的mRNA 表达。结果：1. 肺组织病理切片观察：NS 组第7 天及第28 天均无肺泡炎及肺纤维化表现， 肺组织结构正常；BLM 组第7 天时主要表现为肺泡炎，BLM 组第28 天时 主要表现为肺纤维化，但肺泡炎仍存在；2.BALF 细胞总、分数的测定结果 分析：NS 组BALF 细胞总数无明显变化，而BLM 组BALF 细胞总数第7 天明显增高，与NS 组比较，差异有统计学意义(P0.05)，第28 天BALF 1 细胞总数恢复至正常水平，与NS 组比较，差异无统计学意义(P0.05)；3. 肺泡炎和肺纤维化分级计分的定量分析：NS 组各时间点均未表现肺泡炎及 肺纤维化。BLM 组肺泡炎程度在第7 天表现显著，与NS 组比较，差异有 统计学意义(P0.05)，第28 天时肺泡炎仍存在，但程度明显减轻，与 NS 组比较，差异无统计学意义(P0.05) 。BLM 组肺纤维化程度在第7 天表现 中度，在第28 天表现显著，与NS 组比较肺纤维化均加重，差异有统计学 意义(P0.05)。4.免疫组化肺组织IL-17A 蛋白的分析：NS 组大鼠肺组织中 IL-17A 表达弱，第7 天及第28 天均无明显变化，而BLM 组第7 天及第 28 天IL-17A 表达较NS 组比较明显增强，差异均有统计学意义（P0.05 ）， 第28 天表达较第7 天有所降低。5.ELISA 检测BALF 中TNF-、IL-17A 显示NS 组大鼠BALF 中的TNF-、IL-17A 含量无明显变化，而BLM 组 第7 天及第28 天TNF-、