鱼类病毒性出血性败血症病毒核蛋白基因的原核表达-华中农业大学学报.PDFVIP

第 卷 第 期 华 中 农 业 大 学 学 报 31 3 Vol.31 No.3 年 月 , 2012 6 JournalofHuazhon A riculturalUniversit June2012376~380 g g y 鱼类病毒性出血性败血症 病毒核蛋白基因的原核表达 ,, , , , 杜 娟123 兰文升23 刘 荭23 郑晓聪23 陈孝煊1 , ; , ; 1.华中农业大学水产学院 武汉 430070 2.深圳市外来有害生物重点实验室 深圳 518045 , 3.深圳出入境检验检疫局 深圳 518045 摘要 通过逆转录聚合酶链式反应( )获得编码病毒性出血性败血症病毒( RT-PCR Viralhemorrhaicse- g p , ) , , ( ) , ticemiavirusVHSV 核蛋白基因 将其克隆至原核表达载体 pET28a并在 E.coliBL21DE3中得到表达 用 。 , 与 对表达产物进行鉴定 结果表明 通过 扩增获得长度为 核蛋白基 SDSWesternblot RT-PCR 1221bp - , , , / , 因片段 诱导表达重组质粒 经 检测 终浓度为 时 诱导 蛋白表达量 pET28aN SDSIPTG 1mmolL 5h - , , 。 , 最高 获得的目的蛋白大小与 蛋白的预测分子质量一致 约为 诱导后的菌液进行超声波破碎后 将 N 48ku , 。 、 沉淀和上清分别用于 SDS电泳 结果表明目的蛋白主要以包涵体的形式存在 表达蛋白经过复性 纯 , 。 , 化 得到了较高纯度的可溶性蛋白 经 Westernblot检测表明 该表达产物能被羊抗 VHSV阳性血清特异性