gAd重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达.PDFVIP

China Biotechnology, 2005, 25( 8): 93~ 97 gAd * 杨泽华 解 军 杨 琦 张悦红 牛 勃 ( 030001) 为了建立人脂联素球状结构域( gAd)原核高效表达体系, 分离纯化 gAd并检测其生物 性, 从淋巴细胞中提取人基因组DNA, CR 扩增出含有脂联素编码序列的片段, 通过 TA 克隆的 方法克隆入 pMD18T载体中, 然后设计适当的引物引入起始密码终止密码以及相应的酶切位 点, 把脂联素球状结构域( gA d)基因亚克隆到表达载体 pBV220, 将序列鉴定正确的重组质粒转化 入大肠杆菌DH5中, 用 42 温控诱导目的蛋白的表达; 超声破菌, 分离纯化包涵体, 8mol/L尿素 溶解, 采用梯度稀释法复性重组蛋白, 动物实验测定其 性结果在大肠杆菌中成功实现了 gAd 稳定的以包涵体形式的高效表达, 表达量约占全菌蛋白的 20% , 经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定分离 得到的包涵体具有较高纯度, 复性后具有降低家兔血糖和游离脂肪酸的作用为进 一步研究 gAd 的生物学 性作用机制奠定了基础 脂联素球状结构域 包涵体 基因工程 ( adiponectin) ( SRA), oxLDL, [1] , , , cDNA , [ 2] [ 6] Scherer 1995, 247 BBFruebis , 4: , , , , gAd, gAd, , mRNA , [3] , [ 7] Yam auch i 1( AdipoR1), 2 [ 4] , : Berg (AdipoR2), AdipoR1 gAd I , , AdipoR2 ; gAd [ 5] : Matsubara , , gAd, B(ApoB) , E(ApoE ), (HDLc) A ( ApoA ); 1 , 1 1. 1 ( ICAM1), 1( VCAM1), E pBV220 DH 5, pMD18T ( Eselectin) A EX Taq DNA dNT E coR IP st IH ind !T4 DNA DNA M arker DL2000 : : * : zehuay026@ yahoo. com. cn T aKaRa, 94 China Biotechnology Vol. 25 No. 8 2005 , DNA Marker DNA /