红树莓“威廉米特” 叶片中黄酮类物质提取探究.docVIP

红树莓“威廉米特” 叶片中黄酮类物质提取探究 　摘　要： 采用乙醇提取法提取红树莓“威廉米特”叶片中的黄酮类物质,并以芦丁为标样，用分光光度计测出果实中总黄酮含量。设定温度、时间、固液比三个因素，通过正交试验探讨红树莓“威廉米特”叶片中黄酮类化合物的最佳提取工艺。实验结果表明:在70℃的条件下,用75 %的乙醇回流提取2h 、固液比为1∶30 时,黄酮类化合物的提取量达到最高。 关键词：红树莓叶片； 黄酮； 芦丁； 正交试验 红树莓(Rubus idaeus L.)为蔷薇科悬钩子属植物,果实柔嫩多汁，富含多种维生素和矿物质元素,被美国人称之为“生命之果”。除此之外,红树莓果实内还含有丰富的花色苷、黄酮醇等黄酮类化合物[2]。现代医学研究表明：黄酮类物质具有降血脂、降血压，加强维生素C的抗氧化和清除自由基等作用[1] 。本课题试验采用有机溶剂提取法，旨在找到红树莓果实黄酮最佳的提取工艺，为树莓资源的开发利用，以及黄酮类物质的提取提供理论参考。 1 材料与方法 1.1 试验材料 本试验材料为红树莓“威廉米特”叶片， 2000年从法国引进栽培。2007年9月，在西昌凉山州盐源地区采集七年生红树莓鲜叶，分别按每10株为一组，共三组，采集每株上不同部位，上、中、下、背阴和向阳等量的叶片（共3000片），洗净沥干充分混合后，冷藏待用。 1.2 试验设计 本试验选用正交试验法，不考虑因素之间的交互作用。确定提取时间（B1 B2 B3分别为1h、2h、3h)、温度（A1 、A2、 A3分别为50℃、60℃、70℃）、固液比（C1、C2、 C3分别为1：10、1：20、1：303种因素，每种因素3种水平，重复3次。 1.3 试验方法 1.3.1 标准曲线的制备 准确称取芦丁对照品20.00mg,置100mL量瓶中,加75%乙醇溶解至刻度,摇匀即得对照品溶液。分别准确吸取0,1.00,2.00,3.00,4.00和5.00mL分别置于25mL比色管中,加5.00mL的75%乙醇，各加1%的Alcl35.00mL,摇匀放置6min,然后在用75%的乙醇定容至刻度，摇匀,再放置20min。,在420nm波长处,测定吸光度值,经统计处理,得回归方程[3]:A= 26.939C + 0.0074，相关系数: R=0.9998（其中A—吸光度,C—浓度,mg/mL）。 1.3.2 样品处理及黄酮含量测定 将采集的树莓叶片阴干待用,将叶片烘干恒重后用研磨器磨碎并过100M的筛。配制一定量的75%的乙醇溶液备用。配制一定量的1%三氯化铝溶液备用。先称取定量（50g）过筛后，每个处理取样品0.50g，用75%乙醇溶液为萃取液，在不同处理条件进行电热恒温水浴锅振荡加热。过滤，剩余残渣按原处理加入75%乙醇，再置入电热恒温水浴锅振荡加热。共设置三次重复试验。然后用75%的乙醇定容到50.00mL，摇匀。分别取50%的溶液定容到50.00mL, 摇匀。再分别取5.00mL样品乙醇提取液与25mL的比色管中，加入1%三氯化铝溶液5.00mL，然后用75%的乙醇定容到刻度。另取5.00mL的溶液加入纯水5.00mL定容到50.00mL（做空白试验）。在波长（420nm）处进行比色作测定,根据回归方程计算出样品中的黄酮含量。根据公式计算： 　　黄酮含量(mg/100g)={[(0.0371A-0.003)*50]/0.5}*100 （其中A-吸光度） 2 结果与分析 2.1 正交试验结果 根据正交试验原理，黄酮含量公式计算可得出试验结果,根据数据，试验所得R值(RC=476.37 RB=141.66 RA=75.30)可判断出各因素对红树莓叶片中黄酮含量的影响由C，B，A,递减，即固液比对试验结果影响最大,提取时间的影响次之,温度也有一定的影响。在此比较中，回流提取2小时，优于1小时，3小时；提取温度，70度优于60度和50度；固液比1:30要优于1:10和1:20。同时，根据方差分析理论，结果表明，因素C对提取工艺影响非常显著。由于因素水平数≥3时，F检验显著，并不一定所有的水平之间差异都显著，故必须进行多重比较。分析结果均表明, C3、C2与C1有极显著差异，C3与C2差异不显著。由此可得，A3B2C3和A3B2C2组合都有可能成为最佳组合。进一步将A3B2C3和A3B2C2组合做比较试验，结果表明：A3B2C3较好，提取值为175.95mg/100g。 3 结论 　　根据试验数据经方差分析得出，红树莓叶片中提取总黄酮含量的最佳工艺条件为A3B2C3,即提取温度为70℃，每次回流提取2小时，提取剂用量为1：30(g/mL)为最佳。提取值为175.95mg/100g。而根据资料，徐雅琴[4]等在《黄树莓中黄酮类物质的