组织因子途径抑制物-2对宫颈癌体内体外生长作用的探究.pdfVIP

·中文论著摘要· 组织因子途径抑制物．2对宫颈癌 体内体外生长作用的研究 刖 吾 宫颈癌是全世界妇女中第二位常见的恶性肿瘤，在中国女性中发病率居第一 位。宫颈癌的形成是一个渐进的变化过程，一般要经过鳞状上皮不典型增生、原 位癌发展到浸润癌。目前高危型HPV持续感染被公认是宫颈病变进展为宫颈癌的 高危因素。但是HPV感染不是导致宫颈癌的唯一因素。提示有其他辅助因素共同 参与宫颈癌发病病理机制。因此，近年来促进宫颈癌发生发展的分子基础研究受 到广泛关注。蛋白水解酶降解细胞外基质是肿瘤生长和转移的关键步骤。组织因 factor 子途径抑制物一2(Tissue pathway associatedserine (placentalprotein5，PP5)和基质相关丝氨酸蛋白酶抑$1]费：U(matrix protease 型丝氨酸蛋白酶抑制剂，可由人体内多种组织合成分泌相应的细胞外基质(ECM) 组织因子(tissuefactor,TF)复合物等从而维持ECM结构的完整性。 pathway 白水解酶的抑制作用，主要是通过Kunitz结构域l对丝氨酸蛋白水解酶活性的抑 制。参与ECM降解的一系列蛋白酶中，最关键的是基质金属蛋白酶(MMPs)。MMPs 几乎参与了ECM重塑的所有过程。上调MMPs的表达能够明显促进包括宫颈癌在 内的大多数恶性肿瘤的发生发展。而TFPI．2可以通过多价螯合作用抑$I]MMPs酶原 激活，从而有效调节MMPs的活性。TFPI．2基因存在一个典型的220 bp的磷酸胞苷 酰(cytidylylphosphate 类肿瘤细胞中．都发现编码TFPI一2基因的抑制及缺失。TFPI一2的表达抑制与其启 I 动子区域的超甲基化状态有关。TFPI-2作为一种丝氨酸蛋白酶抑制物，具有抑制 肿瘤侵袭、转移的功能。 研究发现TFPI．2在宫颈癌组织及宫颈癌细胞株中存在高甲基化状态，但是目 前关于TFPI．2对宫颈癌发生发展的关系以及对肿瘤细胞生物学行为的影响尚未见 报道。本课题旨在研究TFPI．2在宫颈癌组织中的表达作用情况，比较其与宫颈癌 临床病理特征的关系；TFPI．2的表达在体内与体外对宫颈癌细胞增殖、凋亡及侵 袭能力的影响，为寻找宫颈癌治疗提供新思路。 方 法 一、TFPI．2在宫颈癌组织中的表达及与宫颈癌临床病理参数的 关系 应用免疫组化方法检测68例宫颈癌、48例CIN和12例正常宫颈组织中TFPI．2 蛋白的表达，并探讨其与宫颈癌临床期别、病理分级及淋巴结转移等临床病理参 数之间的关系。 二、 通过体外实验研究TFPI．2对宫颈癌细胞增殖、凋亡及侵袭 能力的影响 blot和Real．time 测细胞凋亡，计算凋亡指数：建立TFPI．2高表达细胞系；Western V／FITC检测细胞凋亡； 增殖活性；流式细胞仪技术检测细胞周期；Annexin Transwell检测细胞侵袭能力。 三、TFPI．2对人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的影响 TFPI．2转染前后的宫颈癌细胞系裸鼠移植瘤的建立；观察裸鼠的一般情况， PCR和免 每四天测量肿瘤的体积，处死裸鼠后测量肿瘤的体积和重量：Real．time 疫组化检测转染前后移植瘤TFPI．2基因和蛋白表达水平。 结 果 一、TFPI．2在宫颈癌组织中表达 ． 2 J下常宫颈组织、CIN和宫颈癌中TFPI．2表达逐渐降低，三者间比较差异