第二节 微生物菌种选育.ppt

第二章 菌种选育 本章主要内容 第一节 菌种的分离筛选 第二节 菌种选育 第三节 生产菌种的扩大培养 第四节 菌种的保藏与复壮 第一节 菌种的分离筛选 一、菌种的来源 根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买； 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 二、分离思路 新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。 实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。 有了优良的菌种，还要有合适的工艺条件和合理先进的设备与之配合。 定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 分离筛选：采用选择性培养基利用分离技术得到纯种目的菌。 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。 （一）采样 1、采样对象 以采集土壤为主。一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主，富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。 2、采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。 3、采土方式：在选好适当地点后，用小萨子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回，以便及时分离。 采取土壤样品要考虑的几个问题 土质肥，微生物含量高，特别肥沃的土壤中细菌多，放线菌少；在植物残体枯枝落叶下的土壤中较多含有拮抗性真菌。 离地面5~20cm处的土壤通气良好、不受阳光直射，含菌量最高。 采土季节以春秋两季最好。 采土方法：选择适当地点、铲除表土、取土样数十克，盛入事先准备的无菌防水纸袋中，其上记录采土时间、地点、植被情况等。 多点采土、混合分离，可以代表每一地块上的微生物分布平均情况 （二）增殖培养 含有目的菌较多的土样不需要富集培养 如果原有样品中目的菌含量低，可以人为地添加相应的基质，培养使之以较其它微生物更快的速度生长繁殖，从而提高它们在样品中的比例，便于分离。 富集培养的一般方法：采用有利于目的菌种而不利于无关微生物的营养和培养条件，以达到使目的菌种在群体中比例上升的目的。 例如碳源利用的控制，可选定糖，淀粉、纤维素，或者石油等，以其中的一种为唯一碳源，那么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常生长，而其它微生物就可能死亡或淘汰。这样对下阶段的纯种分离就会顺利得多。 一些有特定物质产生能力的菌种，不容易富集，只有通过大量艰苦的工作筛选取得。 某些细菌的富集条件 富集对象 接种菌样 添加营养物(g) 特殊培养条件 好氧氨基酸氧化菌 土壤 – 好氧，pH7.0 好氧性芽孢杆菌 土壤，巴氏消毒 – 好氧，pH7.0 氨基酸发酵性梭菌 土壤，巴氏消毒 – 厌氧，pH7.0 耐碱解尿素芽孢菌 土壤，巴氏消毒 尿素50 好氧，pH8.6 厌氧八叠球菌 土壤 葡萄糖20 厌氧，pH2~3 乳酸菌 植物体或牛奶 葡萄糖20 厌氧，pH6.5 肠道细菌 土壤或污水 葡萄糖20，CaCO320 好氧或厌氧， pH7.0 丙酸菌 干酪 乳酸钠20 厌氧，pH7.0 醋酸菌 果实或生啤酒 乙醇40 好氧，pH6.0 注：培养基成分为酵母膏10g，KH2PO4或K2HPO4 1.0g，MgSO4·7H2O 0.2g，加水1000ml。一般培养在30℃下。 （三）培养分离 尽管通过增殖培养效果显著，但还是处于微生物的混杂生长状态。因此还必须分离，纯化。在这—步，增殖培养的选择性控制条件还应进一步应用，而且控制得细一点，好一点。纯种分离的方法有划线分离法、稀释分离法。 （五）菌种鉴定 经典分类鉴定方法：形态特征、生理生化特征、血清学试验等。 现代分类鉴定方法：遗传特性、细胞化学组分、计算机数值分析。 （五）毒性试验 自然界的一些微生物是在一定条件下产毒的，将其作为生产菌种应当十分当心，尤其与食品工业有关的菌种，更应慎重。据有的国家规定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性试验外，其他微生物作为食用，均需通过两