一、兽医传染病学实验室注意事项二.pptVIP

新城疫病鸡剖检 及病毒学检查 蒲 娟 E-mail:pujuanzgz@ Tel:一、兽医传染病学实验室注意事项 二、兽医传染病的一般诊断程序 三、病鸡剖检及细菌学检查 一、兽医传染病学实验室注意事项 注意个人预防、避免病原传播 穿着工作服，实验结束后需立即消毒清洗。 实验操作期间，勿以手指或其他器物等接触口唇、眼、鼻及面部。 实验完毕，应洗手消毒后离去。 一、兽医传染病学实验室注意事项 危险材料及其污染的器物处理 动物尸体、内脏、血液等废弃病料，以及废弃的病原培养物、生物制品等须深埋或经过严格消毒处理（焚烧、煮沸、高压灭菌等）后丢弃到公共垃圾处理场，严禁将未经消毒的危险性材料直接丢弃。 用过的棉球、纱布、吸水纸等污物须置于固定容器内统一消毒处理，不得任意抛弃。 桌面、地板或地面被污染时，应用适当消毒液清洗。 二、兽医传染病的一般诊断程序 三、病鸡剖检及病毒学检查 实验目的 1. 掌握动物病毒病实验室诊断的一般程序。 2. 掌握病鸡剖检的一般方法。 3．了解鸡新城疫的病理变化和临诊要点。 4．掌握新城疫病毒的分离鉴定。 三、病鸡剖检及病毒学检查 尸体剖检 尸体剖检 1. 全身黏膜和浆膜出血，淋巴系统肿胀、出血和坏死，以消化道和呼吸道为明显。 2. 口腔有黏液，嗉囊内积酸臭味液体和气体； 3. 腺胃黏膜水肿，其乳头或乳头间有鲜明的出血点，或有溃疡或坏死。肌胃角质层下也可见出血点。 病毒分离 将脾脏剪碎，按照1:5的比例加入含三抗的PBS，用研磨器研磨成组织匀浆 将匀浆置于1.5ml离心管中，5000rpm离心10min。 离心后，取上清0.1ml接种鸡胚 37度孵化鸡胚72h（每隔12h照胚，挑出死胚和弱胚），弃掉24h之内的死亡胚 收获鸡胚尿囊液之前，将鸡胚置于4度6h以上，促进血管收缩 收获尿囊液，测定尿囊液的HA效价， 并用新城疫的阳性血清进行HI实验，做出鉴定 鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的病原的一种培养方法，此方法可用以进行多种病原的分离、培养，毒力的滴定，中和试验以及抗原和疫苗的制备等。 鸡新城疫病毒适宜接种在尿囊腔和羊膜腔内，生长后，鸡胚全身皮肤出现出血点，以脑后最显著。 常见接种方法： 1.尿囊腔接种 2.绒毛尿囊膜接种 3.卵黄囊接种 4.羊膜腔接种 鸡胚孵育 气室向上放置，孵育的最适温度为37℃，相对湿度为40—70％，孵育72—96h 接种后检查 接种后24h内死亡的鸡胚，系由于接种时鸡胚受损或其他原因而死亡，应该弃去； 24h后，每天照蛋2次，如发现鸡胚死亡立即放入冰箱，于一定时间内（72h）不能致死的鸡胚亦放入冰箱冻死，以便收缩血管。 死亡的鸡胚置冰箱中1～2h即可取出收取材料并检查鸡胚病变。 鸡胚收获 原则上接种什么部位，收获什么部位。 尿囊腔内接种者用无菌手术去气室顶壳，打开整个气室区； 以无菌镊子撕去一部分蛋膜，撕破绒尿膜而不撕破羊膜； 用镊子轻轻按住胚胎，以无菌吸管或消毒注射器吸取绒毛尿囊液置于无菌试管中，多时可收获5～8mL； 将收获的材料低温保存。 * * 实验室诊断 病理组织学、病原学（涂片镜检、病原分离、PCR、动物回归）、血清学（HI、AGID、ELISA）等 临床诊断 流行病学、临床症状、病理解剖等 发生疫情 确 诊 疑似新城疫病 流行病学调查 尸体剖检 （取样、病变的观察） 病原的分离 病原的鉴定 做出诊断 （发病时间、发病率、死亡率、发病鸡群的用药和免疫情况等） 取样：病变组织（脾脏—病毒分离）、血液 病变的观察：口腔、嗉囊、气管及肺、腺胃与肌胃、肠道粘膜。 病毒分离：鸡胚 血凝（HA）与血凝抑制（HI）试验 尸体剖检 病鸡剖检基本原则 1、外 内 2、观察 取样 剖检 3、肝 脾 胃 肠 法氏囊 肾脏 肺 心 喉头、气管 脑 尿囊腔接种步骤 标本处理：病料研磨（5倍至10倍稀 释），除菌处理 照胚： 活胚检查： 胚动、血管、绒毛尿囊 膜发育 确定接种部位：画气室、画接种部 位（避开大血管及头部） 消毒：酒精—碘酒—酒精 接