流式细胞仪在肿瘤免细胞治疗的应用.PDFVIP

流式细胞仪在肿瘤免疫细胞治疗的应用 肿瘤免疫治疗可以广义地分为非特异性和肿瘤抗原特异性两大类 。非特异性的手段包括免疫检验 点阻断和非特异地激活免疫细胞 ；而肿瘤抗原特异性的方法主要是各种各样的肿瘤疫苗和过继免疫细胞 疗法。 过继性免疫效应细胞治疗 （adoptivecelltransfertherapy ，ACT），是指从肿瘤患者中分离免疫活性细胞 ， 在体外进行扩增和功能鉴定 ，然后向患者转输 ，从而直接杀伤肿瘤或激发机体的免疫应答杀伤肿瘤细胞。 为规范细胞治疗技术的临床应用 ，保证医疗质量和医疗安全 ，卫生部先后制定了 《人体细胞治疗 研究和制剂质量控制技术指导原则》，《自体免疫细胞(T细胞、NK细胞)治疗技术管理规范》(试行) 。 细胞制品的质量控制其中包括细胞总数 、活性 ，细胞的纯度和均一性及生物学效应 。 细胞表型是细胞基本生物学性质之一 。在细胞生物学的研究中，细胞表型反应出细胞群均质程度 、 细胞生物学功能 、细胞分化程度 、细胞衰老程度 ，是细胞产品的最为重要的质量标准 。流式细胞术是 检测细胞表型的通用技术 。 第一节 细胞因子介导的杀伤细胞 （cytokineinducedkiller ，CIK）疗法 最初是指在正常人体外周血中只占1～5%的CD3+CD56+ 的T淋巴细胞 。目前国内外制备的用于过继免疫治疗的CIK 细胞 ，实际上是体外扩增出的以 CD3+CD56+ 、CD3+CD8+ 为主的异质性细胞群 。该细胞群是在多种细胞因子如 IL-2 、 IFN-γ及某些单克隆抗体的刺激下 ，由从外周血 、骨髓或脐血中分离出来的单个核细胞在体外培养扩增而成 ，具有广泛的 非MHC 限制的极强的溶瘤活性 。 1、流式细胞术对CIK培养条件的优化的应用 文章 ： Optimized Protocols for Generation of Cord Blood-derived Cytokine-inducedKiller/NaturalKillerCells 本文分别了解不同细胞因子组合扩增的脐血 CIK 、NK细 胞对人K562细胞株的杀伤活性的差异性 。使用三组细胞因子 诱导脐血CIK和NK细胞的扩增 ，A 组 ：SCF,IL-2,IL-7,IL-15 ； B组 ：SCF,FLT3ligand,IL-2,IL-7,IL-15 ；C 组 ：IL-2,IL-7,IL-15 ， 通过BeckmanCourterFC500流式细胞仪对培养后细胞表型 CD3+CD4+ ，CD3+CD8+ ，CD3+CD56+ ，CD3-CD56+ 的分析 ， 认为B组方案能够同步有效的诱导脐带血 CIK和NK细胞的 扩增 。 图示 ：使用A,B,C组方案后0,14,21天测定CIK ，NK ，T细胞的 表型结果 。 1 2、评价免疫治疗后患者的免疫状态 第二节 树突状细胞 （DC）免疫治疗 树突状细胞(DC)是唯一能刺激初始T细胞活化的专职抗原递呈细胞 ，具有很强的抗原递呈功能 ，因此日益受到免疫治 疗的科研和临床工作者的重视 。DC来源比较广 ，包括骨髓 、外周血 、脐带血等 ，但该种细胞在机体内含量极低 。近年来 ， 体外培养DC 获得成功 ，为其功能及分化状态的深入研究和在肿瘤生物治疗领域中的应用创造了条件 。 目前国内外比较公认鉴定 DC主要采用 CD1a和CD83分子 。CD1a是鉴定人外周血与骨髓中DC的最好标记 ，所以 采用CD1a阳性细胞数的多少来反映DC 的数量 ;CD83分子是 DC的成熟标记 ，在DC培养早期不表达 CD83分子 ，当成 熟时才表达 CD83分子 ，目前研究中也主要用 CD83分子的表达量来比较不同来源或不同细胞因子 、不同培养方法获得 的DC 的成熟度 。另外 ，成熟DC表面表达丰富的有助于抗原提呈的分子 ，如高度表达MHC工 、I类分子 ，共刺激分子 B7.I(CD80),B7.2(CD86) ，细胞间粘附分子 CD40,IC AM-1(CD54) 等 。 文章 ： 1.Thecryopreservationo