用fl2200型高效液相色谱仪检测咸鸭蛋中的苏丹红一号.docVIP

用FL2200型高效液相色谱仪检测红心咸鸭蛋中的苏丹红I号 林直宏 孙剑 毛海军 刘辰 （杭州福立分析仪器有限公司） 摘要：本文介绍了采用福立分析仪器有限公司生产的FL2200型高效液相色谱仪，测定红心咸鸭蛋中的苏丹红I号的方法。样品中的苏丹红I号用乙腈提取出来后，采用C18柱，以乙腈—水为流动相，在波长为478nm的条件下进行分析测定。检测限为10μg/L，峰高的RSD为1.46%，峰面积的RSD为3.72%，回收率为92%。 关键词：苏丹红I号：高效液相色谱；红心咸鸭蛋 苏丹红I号（Sudan I,分子式：C16H12N2O），化学名为1-苯基偶氮-2-萘酚，是一种工业用油溶性偶氮染料，在工业应用中也被称为溶剂14或油溶黄R[1]。有关研究表明，苏丹红I号会导致鼠类患癌，它对人类肝细胞也显现出可能致癌的特性，欧盟禁止苏丹红I号作为色素添加剂在食品中使用，我国也作了相应的规定。2005年初国家质检总局发出通知，严堵苏丹红色素污染的食品进入我国。2005年2月29日,国家质检总局和国家标准委批准发布《食品中苏丹红染料的检测方法—高效液相色谱法》国家标准[2]。但未见用国产的高效液相色谱仪法测定红心咸鸭蛋中苏丹红I号的相关报道，本实验采用福立生产的高效液相色谱仪测定红心咸鸭蛋中的苏丹红I号，达到了国家检测标准的要求。 1 材料和方法 1.1 仪器与试剂 FL2200型高效液相色谱仪，FL2200紫外检测器，手动进样阀（7725i），Easy3000色谱工作站，超声波清洗器，蜗旋混合器，真空旋发仪，乙腈（HPLC级），超纯水。 1.2 材料 红心咸鸭蛋（市场随机采购） 1.3 实验方法 1.3.1 色谱条件 色谱柱为Venusil XBP-C18柱（5μm, 4.6mm ×250mm）;柱温为室温；流动相为乙腈—水（90：10，V/V），使用前需进行超声波脱气处理；流速为1.0ml/min；紫外检测器波长为478nm；进样量20μL。 1.3.2 计算[3] 样品中苏丹红色素含量按下式计算： Xi(μg／g)= （Ai×Csi×V）/（Asi×m） Asi一标样溶液中苏丹红1号的峰面积 Ai一样品溶液中苏丹红1号的峰面积 Csi一苏丹红1号标准溶液浓度， μg／mL V一最后试样溶液定容体积，mL m一试样的重量，g 1.3.3 苏丹红I号标准溶液的配定 a.准确称取0.01g苏丹红I标准品，稀释后用容量瓶定容，得浓度为1μg/ml的苏丹红I号标准溶液。 b.分别把上述（a）的苏丹红I号标准溶液，稀释成浓度为0.8μg/ml，0.3μg/ml，0.1μg/ml，0.05μg/ml，0.01μg/ml的苏丹红I标准溶液。 1.3.4 样品处理[4] a.称取5g蛋黄，置于250ml锥型瓶中，加50ml乙腈，充分搅拌均匀，在蜗旋混合器中充分混合3分钟，超声波震荡1小时，滤纸过滤，0.45μm的有机滤膜过滤后，定容50ml上机检测。 b.称取5g蛋白，置于250ml锥型瓶中，加50ml乙腈，充分搅拌均匀，在蜗旋混合器中充分混合3分钟，超声波震荡1小时，滤纸过滤，0.45μm的有机滤膜过滤后，定容50ml上机检测。 c.称取5g蛋白，置于250ml锥型瓶中，加标准苏丹红I(浓度为1μg/ml)溶液5ml,加45ml乙腈，充分搅拌均匀，在蜗旋混合器中充分混合3分钟，超声波震荡1小时，滤纸过滤，0.45μm的有机滤膜过滤后，定容50ml上机检测。 d. 称取5g蛋白，置于250ml锥型瓶中，加标准苏丹红I(浓度为1μg/ml)溶液1ml,加45ml乙腈，充分搅拌均匀，在蜗旋混合器中充分混合3分钟，超声波震荡1小时，滤纸过滤，0.45μm的有机滤膜过滤后，定容50ml上机检测。 2 结果与分析 2.1线性关系 取苏丹红I号，配置成浓度为：1μg/ml，0.8μg/ml，0. 3μg/ml，0.1μg/ml，0.05μg/ml，0.01μg/ml溶液，依次进样检测，结果如下表 表1 苏丹红1号的浓度与峰面积的关系数据 浓度(μg/ml) 峰面积（uAU*s) 0.01 3965 0.05 7011 0.1 10231 0.3 30081 0.8 75032 1 96375 图1 浓度与峰面积的线性相关性 线性方程为：y=93070X+2059.5; R2=0.9992. 2.2 最低检测限 配置浓度为10μg/L的苏丹红I号标样进样，色谱图如下： 图2 苏丹红I（浓度为10μg/L）的最低检测限图谱 由图2可得知，苏丹红I号的最低检测限可达到10μg/L以下，符合国标法（GB/T 19681 2005）提出的最低检测限要求。 2.3 标准样品的相对标准偏差（RSD） 取浓度为0.1μg/ml的标样重