棕色固氮菌钼铁蛋白结晶.PDFVIP

维普资讯 第7卷 第1期 水生生物学集刊 Vo1．7，No．1 1980年 5月 ACTA HYDRoBIOLOGICA SINICA May，1980 棕色固氮菌钼铁蛋白结晶 及一些物理化学性质术 中国科学院水生生物研究所第五室生化、遗传组术术 提 要 · — 获得了棕色固氮菌固氮酶钼铁蛋白的针状结晶，大小为2—2．5×25—65微米，成晶所要 求的条件不是很严格的。 SDS电泳和氨基酸分析结果表明，钼铁蛋白分子量为250，000。只观察到一种类型亚单 位。其中酸性氨基酸占优势。 分子氧使针状晶体演变为发状晶丝，晶丝又密集成束。晶束可保存较长时间。氧使钼铁 蛋白在电泳时形成高聚合态。 固氮酶是生物固氮过程中将分子氮还原为氨的酶系统，它由二个蛋白即钼铁蛋白和 铁蛋白组成，二个组分对于酶的活力都是必需的。进化程度不同的固氮生物，其固氮酶的 作用原理基本上是相同的，它们的二个组分之间有的可以交叉互补形成有功能的固氮酶， 有的彼此不能互补。我们的研究结果表明，柱孢鱼腥藻固氮酶的钼铁蛋白可以与棕色固氮 菌固氮酶的铁蛋白互补Ⅱ】，看来棕色固氮菌和蓝藻固氮酶的钼铁蛋白可能有较大程度的 类似性，但有关钼铁蛋白的物理化学性质仍存在一定的差异，特别是棕色固氮菌钼铁蛋白 的物理化学性质，文献报道的结果往往出入较大。已报道的分子量有216，000阳，270，000H】 和245，000~a51，至于亚单位类型，有人认为是一种类型“，有的作者坚持是二种类型[6,I51最 近 Kennedy等口证明不同来源的钼铁蛋白的亚单位类型数目与电泳时使用的SDS有关， 钼铁蛋白是多聚体蛋白，可能会依条件的不同呈现不同的解离 聚合状态 叫。分子氧 能使固氮酶失活。这种失活作用是否与酶蛋白的聚合状态也有关。显然，钼铁蛋白物理 化学性质的确定，对于阐明固氮酶的结构和功能以及固氮所包含的基因数目和性质都是 必要的。为准确测定这些物理化学性质，就需要用高纯度的钼铁蛋白进行试验。本文报 道了棕色固氮菌固氮酶钼铁蛋白结晶及它的一些物理化学性质。 材 料 和 方 法 棕色固氮菌 (AzotobactervinelandiiNO230)菌糊由中国科学院原子能利用研究所 本工作的初步结果曾于1975年在化学模拟生物固氮学术讨论会上报告。 参加工作人员有：王业勤、戴玲芬、何家菀、杜代贤、林惠民、何振荣、李辛夫、谭渝云、黎尚豪：显微摄影承何楚 华同志协助，特此致谢。 维普资讯 水 生 生 物 学 集 刊 第 7卷 m- 惠供，一20。C保存。 ． (1)钼铁蛋白的分离提纯和结晶，参照 Shah等 和林土所固氮组 方法，用超声击 碎器击破细胞，55~(2热处理8一l0分钟，离心30，000×g／分，20分钟，得棕色上清液，通 过二次DEAE-11纤维素柱层析分离纯化，除无细胞提取液外，分离过程均在厌氧条件下