甜菜碱对脱氮假单胞杆菌发酵产ＶＢ１２影响.doc

甜菜碱对脱氮假单胞杆菌发酵产ＶＢ１２影响 　王振国　曹云峰　陈学军　李永亮　李昆太　张嗣良 [摘要] 通过研究不同甲基供体（甜菜碱和氯化胆碱）对脱氮假单胞杆菌发酵产VB12的影响，结果表明甜菜碱能显著促进VB12的生物合成；在此基础上考察了发酵培养基中甜菜碱浓度对VB12合成的影响，结果表明15 g/L的甜菜碱下VB12的合成量最高；进一步研究了甜菜碱对脱氮假单胞杆菌发酵过程的影响，结果表明发酵液中一定浓度的甜菜碱可以显著提高δ-氨基乙酰丙酸的合成量，从而促进VB12的合成。 　　[关键词] 甜菜碱；菌体生长；VB12合成；δ-氨基乙酰丙酸；脱氮假单胞杆菌 　　 　　[Abstract] The effect of different methyl-group donors (betaine and choline chloride) on vitamin B12 production in shake flasks with Pseudomonas denitrificans was studied, and the results demonstrated that the addition of betaine to the fermentation medium could greatly stimulate biosynthesis of vitamin B12. Betaine concentration in fermentation medium was further investigated in shake flask, as a result, 15 g/L of betaine was the most beneficial for vitamin B12 synthesis. Moreover, the effect of betaine on the fermentation of P. denitrificans was studied, it was found that the δ-aminolevulinic acid (ALA) biosynthesis could be significantly improved when betaine was kept at certain concentration in the broth, thus the biosynthesis of vitamin B12 was greatly increased. 　　[Key words] Betaine;Cell growth;Vitamin B12 biosynthesis;δ-aminolevulinic acid,;Pseudomonas denitrificans 　　 　　维生素B12（VB12）通常用来表示钴胺素类化合物，它是一种重要的生物活性物质，可以用来治疗恶性贫血症，同时也是许多微生物和动物的生长因子[1]。自然界中，VB12的生物合成存在两种不同的途径，即好氧途径和厌氧途径，但是VB12的生物合成严格局限于一些微生物中[2]，目前用于商业化生产VB12的微生物主要有谢氏丙酸杆菌（Propionibacterium shermanii）、菲氏丙酸杆菌（P. freudenreichii）和脱氮假单胞杆菌（Pseudomonas denitrificans）等。P. denitrificans好氧合成VB12的途径已经详细阐明[3]。正是由于对VB12合成途径的了解，所以可以通过诱变和分子生物学等手段来改造菌株，已经使得P. denitrificans菌株的VB12生产能力大大提高[2]。由于VB12产率高, 目前在工业生产中几乎都是使用P. denitrificans来作为好氧生产VB12的工业菌株。P. denitrificans好氧合成VB12的过程一共需要8步甲基化[4]。氯化胆碱（氯化-β-羟乙基-N,N,N-三甲基铵）和甜菜碱（三甲基甘氨酸）的每个分子含有三个甲基，它们通常作为生物合成VB12的甲基供体。White等 [5]第一次报道在P. denitrificans中，甜菜碱-高半胱氨酸转甲基酶对VB12的大量合成具有非常重要的作用。甜菜碱-高半胱氨酸转甲基酶催化甜菜碱向高半胱氨酸转移一个甲基，分别形成二甲基甘氨酸和甲硫氨酸[6]，因此甜菜碱在参与VB12生物合成过程中的甲基化具有非常重要的作用。Demain等[7-9]的研究表明，甜菜碱对P. denitrificans中VB12的合成和卟啉的过量生成起着重要的作用。另外，甜菜碱是一种良好的渗透压调节剂[10]，有文献报道甜菜碱和胆碱能促进细胞表面对代谢产物的分泌，从而对细菌产VB12具有刺激效果[11]。