红景天苷对大鼠急性心肌缺血及乳鼠心肌细胞保护作用.doc

红景天苷对大鼠急性心肌缺血及乳鼠心肌细胞保护作用 　 作者：颜天华 马莹 杨伟 王秋娟 贾莹 潘志伟 【摘要】 目的研究红景天苷对大鼠急性心肌缺血的保护作用，以及对乳鼠心肌细胞于缺氧/复氧损伤和氧化损伤下的影响。方法以垂体后叶素（pituitrin）制备大鼠急性心肌缺血模型，观察急性心肌缺血大鼠Ⅱ导联心电图的变化。体外培养原代乳鼠心肌细胞，采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)诱导心肌细胞缺氧/复氧损伤和过氧化氢(H2O2)诱导造成氧化损伤模型。MTT法测定细胞存活率并测定乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)浓度。结果红景天苷能显著抑制垂体后叶素所造成的心电图T波抬高和J点升高；能明显提高缺氧/复氧模型和氧化损伤模型下的细胞存活率，降低培养液中的LDH和CK浓度。结论红景天苷对急性心肌缺血损伤、缺氧/复氧损伤和氧化损伤均有较好的保护作用。 【关键词】 红景天苷 急性心肌缺血 心肌细胞 缺氧/复氧 氧化损伤 红景天为景天科景天属Rhodiola L.多年生草本植物，主要生长于高寒、缺氧的地区，因此具有极强的环境适应能力和生命力。在我国红景天的应用已有悠久历史，在西藏被誉为“高原人参”，为藏族习用药材。红景天主要有效成分有红景天苷、酪醇，此外含有淀粉、蛋白质和具有生物活性的多种微量元素，国内外的研究主要集中在红景天苷、红景天素和酪醇上［1，2］。近年来的研究结果表明，红景天具有抗肿瘤、抗衰老、抗缺氧、抗寒冷、抗辐射等多种功能。本实验研究红景天苷对急性心肌缺血损伤的影响以及对缺氧/复氧损伤和氧化损伤的心肌细胞的影响，为开发具有临床应用价值的抗心肌缺血新药提供依据。 　　1 器材 　　1.1 药品与试剂注射用红景天苷，由成都恒基医药科技有限公司提供，纯度大于90%；葛根素注射液，北京协和药厂生产；注射用盐酸地尔硫卓（合贝爽），天津田边制药有限公司进口分装；垂体后叶素注射液，上海第一生化药业有限公司生产；连二亚硫酸钠，天津市福晨化学试剂厂生产，分析纯；溴化-(4、5二甲基-2-噻唑基)-2、5二苯基四氮唑(MTT)，美国sigma公司出品；乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒及肌酸激酶(CK)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；其它试剂均为市售分析纯。 　　1.2 仪器ECG-6511型心电图机，日本光电工株式会社出品；紫外可见分光光度计(TU-1800)，北京普析通用仪器有限责任公司出品；DG-5031型酶联免疫检测仪，华东电子集团医疗装备有限责任公司出品。 　　1.3 动物SD大鼠，雌雄各半，（220±20）g，清洁级；SD孕大鼠，清洁级；均由河南省实验动物中心提供，许可证号：SCXK(豫)2005-0001。 　　2 方法 　　2.1 红景天苷对垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血的影响［3］SD大鼠70只，雌雄各半，随机分为7组。分别为正常对照组和模型组（均给予等量生理盐水），葛根素组（12.0 mg/kg），地尔硫卓组（1.5 mg/kg），红景天苷高、中、低剂量组（24.0，12.0，6.0 mg/kg）。以上各组以不同浓度等容积给药0.5 ml/kg。 　　　 　　将大鼠用3％的戊巴比妥钠以40 mg/kg的剂量腹腔注射麻醉后，仰卧位固定，记录一段正常心电图（S点不高于基线为合格，异常者弃去不用）。静脉给药5 min后尾静脉注射脑垂体后叶素0.75 U/kg［4,5］，给药容积为1.0 ml/kg，注射速度为5～10 s。记录注射后5，10，30 s，1，2，5，10，20 min的Ⅱ导联心电图，观察T波和J点的变化。 　　2.2 红景天苷对心肌细胞的影响 　　2.2.1 对缺氧/复氧（Na2S2O4）所致心肌细胞损伤的影响根据文献［6～8］方法体外培养原代乳鼠心肌细胞。 　　取生长良好的细胞随机分为正常组（给予等量PBS液）；模型组（给予等量PBS液）；葛根素组（终浓度为10-5 mol/L）；盐酸地尔硫卓组（终浓度为10-5 mol/L）；红景天苷高、中、低剂量组(终浓度分别为10-4，10-5，10-6 mol/L)。每组6个孔，加入药物4 h后除对照组外均加入Na2S2O4（终浓度为5 mmol/L），刺激细胞1 h。缺氧损伤1h后，换去细胞培养液为正常含血清DMEM培养液继续培养1 h［9，10］。用MTT染色法测定96孔培养板内心肌细胞的活力(A570表示)。取培养液测定其中LDH和CK的含量。 　　2.2.2 对H2O2诱导心肌细胞损伤的影响［11］取生长良好的细胞随机分组同“2.2.1”。每组6个孔，加入药物4 h后再加H2O2（终浓度为0.5 mmol/L）刺激细胞4 h。用MTT染色法测定96孔培养板内心肌细胞的活力(A570表示)。取培养液测定其中LDH和CK的含量。 　　2.3 统计学处理实验数据用±s表示。