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第七章 微生物的遗传变异和育种( Microbial genetics and breeding ) 遗传变异的物质基础 基因突变和微生物育种 基因重组和杂交育种 基因工程 菌种的衰退、复壮和保藏 第一节 微生物遗传变异的物质基础 一、证明核酸是遗传变异物质基础的经典实验 （一）肺炎双球菌的转化实验 （二）噬菌体的感染实验 （三）烟草花叶病毒的拆开与重组实验 1、 原核生物的基因组 (1)小，为双链的DNA分子，一般具有单一的复制起点； (2)基因组上遗传信息具有连续性； (3)功能相关的基因构成操纵子或形成重叠基因，且常转录为多顺反子mRNA(一个顺反子决定一条多肽链 )。 (4)基因组的重复序列少而短； (5)结构基因的单拷贝及rRNA基因的多拷贝。 （二）原核生物的质粒 定义：是一类小型共价闭合环状的超螺旋dsDNA分子(circular covalently closed DNA, cccDNA) 。 大小：大小为1.5-300kb，相对分子量106－108Da，携带有数个到数十个甚至上百个基因。 性质： ①质粒是一种复制子，根据自我复制能力的不同，分为严紧型复制控制和松弛型复制控制两种。 ②在细胞质中独立存在，也可以整合入染色体上，以附加体的形式存在； ③对于细菌的生存并不是必要的。 ④受理化因素影响，可消除。 （一） 基因工程中应用的质粒 作为克隆载体的质粒应具备以下特点： 1、体积小，便于DNA的分离和培养； 2、分子量相对较小，呈环状，化学分离过程中保持性能稳定； 3、有不受核基因组独立的复制起始点； 4、能稳定存在于细菌体内，有较高的拷贝数； 5、具有1个以上的遗传标志，便于筛选； （1） pBR322质粒 （2）pUC质粒 （1） F质粒 （3）Col质粒 又称大肠杆菌素质粒或产大肠杆菌素因子。 大肠杆菌素是由E.coli的某些菌株所分泌的细菌素，能通过抑制复制、转录、转译或能量代谢等而专一地杀死其它肠道细菌。 大肠杆菌素都是由Col质粒编码的。 T-DNA的染色体整合机制 (6) 巨大质粒 近年来在根瘤菌属中发现的一种质粒，分子量为200~300×106Da，比一般质粒大几十倍到几百倍，其上有一系列固氮基因。 第二节 基因突变和诱变育种 一、基因突变 突变：指细胞内（病毒内）遗传物质的分子结构或数量突然发生的可遗传的变化。 野生型：从自然界分离到的任何微生物在其发生突变前的原始菌株。 突变体：发生了突变的微生物细胞或菌株。 ★依表型的改变分为： 营养缺陷型 抗性突变型 条件致死突变型 形态突变型 抗原突变型 产量突变型 （二）突变率 定义：某一细胞在每一世代中发生某一性状突变的几率。 若干细菌某一性状的自发突变率 菌 名 突变性状 突变率 E. coli 抗T1噬菌体 3 ×10–8 E. coli 抗T3噬菌体 1 ×10–7 E. coli 不发酵乳糖 1 ×10–10 E. coli 抗紫外线 1 ×10–5 S. aureus 抗青霉素 1 ×10–7 S. aureus 抗链霉素 1 ×10–9 Salmonella typhi 抗25?g/L链霉素 1 ×10–6 Bacillus megaterium 抗异烟肼 5 ×10–5 （三）突变的特点 （四）基因突变的自发性和不对应性的证明 在各种基因突变中，抗性突变最为常见。 一种观点认为，突变是通过适应而发生的，即各种抗性是由其环境诱发出来的，突变的原因和突变的性状间是相对应的，并认为这就是“定向变异”，也有人称它为“驯化”或“驯养”。 另一种看法则认为，基因突变是自发的，且与环境是不相对的。由于其中有自发突变、诱发突变、诱变剂与选择条件等多种因素错综在一起，所以难以探究问题的实质。 1. 变量试验----统计学原理 2.涂布试验---突变率 突变率的计算 初始接种量：5 × 104 个/皿； 培养5小时，繁殖了12.3代，每个菌落约含5100个细菌，这时每个平皿上的细胞数为： 5100 × 5 × 104 ≈ 2.6 ×108个/皿 在6个平板上，比接种时增加的细胞数为： 6 ×（2.6 × 108 ? 5 × 104）= 15.6 ×108 在未涂布的平板上共发现28个突变，故 突变率 = 28/15.6 ×108 = 1.8 ×10?8 3. 平板影印培养试验 1952年，J. Lederberg夫妇的论文《影印平板培养法和细菌突变株的直接选择》，更好地证明了微生物的抗药性是在未接触药物前自发地产生的，这一突变与相应药物环境毫不相