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导数分光光度法 卢泽辉 涂海涛 回收率测定 样品含量测定 导数分光光度法是如何消除背景干扰的？ 如何绘制导数吸光度光谱？ 如何从导数光谱上读取定量数据？ 峰－峰法与基线法 * * 把吸收光谱写成波长的函数，那么它的导函数图像就是导数光谱 导数吸光光度法测定应用步骤 吸收曲线的绘制 测定波长的确定 回收率实验 样品测定 标准曲线的测定 实验数据来自于 吴京平《导数分光光度测定中的计算机图形分析》 如何从光谱中读取定量数据？ 导数吸光光度法如何消除背景干扰？ 如何绘制导数吸光光谱 在300～190nm波长范围内，以2nm波长间隔，水为溶剂，测定盐酸黄碱和干扰组分尼泊金乙酯的吸收值(A)，并绘出吸收光谱一阶导数光谱和二阶导数光谱 选取待测组分导数曲线上振幅较大的峰和谷的中间波长，且干扰组分在此两中间波长处的导数值相等或接近相等，做出准确的选择。 在吸收曲线和一阶导数曲线中均无上述原则的波峰和波谷，只有在二阶导数曲线图中盐酸麻黄碱有一较大波谷（208nm）和波峰（220nm），而尼泊金乙酯在200～300nm波长范围内的二阶导数值基本与基线重合，说明干扰可被消除，故可采用2峰－谷法通过测定ΔA值，作为盐酸麻黄碱的定量信息。 准确配制盐酸麻黄碱2.48×10-2，4.96×10-2，9.92×10-2,12.40×10-2，14.88×10-2，17.36×10-2mmol·L-1系列标准溶液7份，以蒸馏水为参比，测定207，208，209，219，220，221nm处的吸收值，并计算ΔA值，作线形拟合，给出回归方程并绘制标准曲线图 结果说明在2.48×10-2～17.36×10-2mmol·L-1范围内浓度C与ΔA值呈良好的线形关系 不同浓度干扰组分影响的实验 准确配制盐酸麻黄碱浓度均为0.124mmol·L-1,二尼泊金乙酯分别为不同浓度的系列混和溶液共8份，按上法测定盐酸麻黄碱的Δ值，结果如下 实验结果表明，在测定盐酸麻黄碱时，不同浓度的尼泊金乙酯对其几乎无干扰 按比例配制盐酸麻黄碱与尼泊金乙酯混和溶液6份，做回收率实验，测定结果如下 精密吸取盐酸麻黄碱滴鼻净5ml于100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后再精取5ml置于另一个100ml容量瓶中，用蒸馏水定容作为待测样品溶液。以蒸馏水作为参比，测定ΔA值，用标准曲线求得盐酸麻黄碱得含量，并和规范法比较，结果如图 从上式可以看出各阶导数始终和试液浓度C呈直线关系，这是导数分光光度定量分析的基础 无论干扰组分吸收曲线形状如何，都可以用一个近似的幂级数来表示 根据吸光度加合性原理，两组分共存时，有下式 其一阶导数为 其二阶导数为 当干扰组分为一次吸收曲线时， 说明一阶导数可以消除线形干扰吸收 当干扰组分为一次吸收曲线时， 说明二阶导数可消除二次干扰吸收 （1）人工作图法：从吸收光谱的数据中每隔一个波长小间隔Δλ（1～2nm），逐点计算出ΔA/Δλ的值： 利用这些数值对波长描绘成图像，就得一阶导数光谱。用类似方法又可从导数光谱中获得高一阶的导数光谱。 （2）仪器扫描法：用双波长分光光度计以固定Δλ（1～2nm）的两束单色光同时扫描记录样品对两束光吸光度的差值ΔA，便得到样品的一阶导数光谱。 装有微处理机的分光光度计，利用它的记忆和处理数据的功能，可直接存储吸收光谱的数据并加以处理，可描述一阶、二阶……等各阶的导数光谱。 X阶导数分光光度法 多波长线性回归导数分光光度法 比值—导数法（比光谱导数分光光度法） 导数光谱－峰面积积分法 一阶导数分光光度法测定水中微量铝 Al3+和Fe3+在pH＝3.62的条件下均与铝试剂生成红色配合物，但两者的吸收光谱严重重叠 在562nm处，Fe3+配合物的导数值为零，而Al3+配合物的导数值近似为最大值。测定此处吸光值，可以有效的消除Fe3+的干扰，并且测Al3+的灵敏度又较高。同时，水样中悬浮物的影响也可以通过导数法消除 二阶导数光谱－峰面积积分法测定芦荟中痕量Fe(Π)和Co(Π) 使用二阶导数－峰零法的处理，虽然解决了重叠问题，但由于λmax常发生漂移、准确性差，并且Co(Π）的灵敏度也无法提高 选定以试剂空白做参比，在400～540nm波长范围内扫描，并做二阶导数光谱。从图上可以看出Co(Π)在410～426nm，Fe(Π)在498～521nm波长范围内络合物的二阶导数吸收光谱区分度好，选此范围进行峰面积的测定，并以此作为定量分析的依据 多波长线性回归－导数分光光度法测定对苯二酚、领苯二酚和苯酚 *