动物分子病原学复习思考题1.doc

动物分子病原学复习思考题 举例阐述动物病原菌基因组学研究的意义。 举例阐述病毒基因组学研究涉及的工作及其科学意义。 以你熟悉的一种动物细菌为例，阐述开展其致病性分子机制研究的思路。 与细菌耐药性相关的分子机制有哪些？ 以你熟悉的一种动物病毒为例，阐述运用你所知的分子生物学技术开展其相关分子生物学研究工作的思路。 动物分子病原学复习思考题 举例阐述动物病原菌基因组学研究的意义 1.细菌基因组学研究的意义 重要致病与毒力基因的发现与研究 例如，HPI毒力岛最早发现于耶尔森菌属，通过对大肠杆菌基因组的分析，他也具有HPI 毒力岛基因，是大肠杆菌的主要致病因子。 寻找灵敏及特异的病原分子标记——发现细菌的特异DNA序列，提高临床诊断的效率和准确性。分析多种病原菌的基因组序列差异，找到某一病原菌特有的基因序列，设计探针建立特异性诊断方法。 3） 促进新药的发现和疫苗的发展识别和筛选药物靶位——微生物基因上的药物靶位（靶基因）一般是一些毒力相关基因、微生物生存必需基因、种特异性基因、某些酶基因和膜转运蛋白基因等。 4） 提高人类对病原菌相关基因功能的认识 通过基因组测序后，我们又发现了许多之前没有认识到的基因及其功能。例如，。。。 5） 细菌基因组的研究为生命科学开辟了新的研究领域——生物信息学、比较基因组学等 例如，发现一个新病原菌或新的变异菌株，可以通过BLAST 生物信息学工具，在GenBank 中确定他的生物学分类地位。 二．举例阐述病毒基因组学研究涉及的工作及其科学意义。 1.病毒基因组学研究的意义 1）测定与鉴定未知基因序列 2）确定重组DNA的方向与结构 3）对突变（变异）进行定位和鉴定 4） 病毒的利用 5） 基因的功能 6） 分子流行病学研究 2.涉及工作 1）基因组核苷酸一级结构分析 比如在研究PCV的过程中，由于其基因组比较小，只有1700nt左右，一般在对其研究之前首先对其基因组测序，为进一步分析基因组功能奠定基础。 2）基因组结构分析 分析基因的开放读框（ORF） 以核苷酸顺序推测相应蛋白质的氨基酸 顺序及二级结构、表位预测 分析结构蛋白基因与非结构蛋白基因 3） 序列相似性比较 例如，MDV 最初发现时，单独划为一科，但是通过对其基因组全长序列测定后发现，其基因组的结构排列与简单疱疹病毒的基因组结构排列相同，UL和US区均有倒置重复序列，所以MDV更接近a-疱疹病毒。 4） 毒株间的差异与变异情况，病毒基因型的分析 比如流感病毒它的HA抗原如果它的两个碱性氨基酸KR挨着,前面第二个氨基酸如果还是碱性氨基酸那么它就是强毒株。 5） 遗传进化、演化规律 对不同来源的PRRSV进行全基因组测序，构建进化树，分析各毒株的亲缘关系。 6） 分子流行病学研究 对PRRSV病毒测序，看各地流行的毒株有什么不同，确定流行的毒株。选择同毒株的疫苗进行免疫预防。 三．以你熟悉的一种动物细菌为例，阐述开展其致病性分子机制研究的思路。 细菌致病性的分子机制 以大肠杆菌为例阐述研究其致病性分子机制的思路： 先研究大肠杆菌与宿主细胞黏附的分子基础 病原性大肠杆菌具有多种毒力因子，引起不同的病理过程，它具有定植因子又称菌毛、黏附素或F抗原，可与黏膜表面细胞的特异性相结合而定植于黏膜，这是大肠杆菌引起的大多数疾病的先决条件。在引起动物腹泻的ETEC中已发现的定植因子有F4、F3、F8、F41。菌毛可与宿主细胞的受体分子特异性结合，特别是与细胞表面的多糖侧链结合。宿主细胞膜上的整合素是细菌侵袭素等的受体，与细菌侵入细胞密切相关整合素广泛分布于上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞及T细胞等细胞的一种跨膜蛋白。 大肠杆菌是胞外菌主要研究它的一些致病因子： 内毒素：大肠杆菌外膜中含有脂多糖，当菌体崩解时被释放出来，其中的类脂A成分具有内毒素的生物学功能，是一种毒力因子，在败血症中其作用尤为明显。 外毒素：大肠杆菌可产生外毒素，有不耐热肠毒素（LT）和耐热肠毒素（ST）。LT 可激活肠毛细血管上皮细胞的腺苷酸环化酶。使肠黏膜细胞分泌亢进，发生腹泻和脱水；ST可激活回肠上皮细胞刷状缘绒毛上的颗粒性鸟苷环化酶，增加cGMP产生，同样引起分泌性腹泻。 大肠杆菌素：从动物的全身性侵入性疾病中分离的许多大肠杆菌，具有产生大肠杆菌素V的质粒。 细胞毒素：又称志贺样毒素（SLT）。与引发人出血性肠炎有关，而SLT-2则能使猪产生水肿病的临诊和病理特征。 细菌致病基因的鉴定方法：体外鉴定技术 克隆筛选法 将有致病力表现型的相关基因转入异源细菌E.coli，在体外鉴定新的致病基因 制备基因文库，然后将基因文库中的DNA片段装在载体（如质粒、噬菌体或黏粒）中，转化E.coli进行扩增，再用与致病有关的蛋白质制成的抗体或探针或抗体以筛选基因文库