含RGD模体的人白细胞介素18(IL218)突变体的.PDFVIP

ISSN 中国生物化学与分子生物学报 2005 年 12 月 CN 　113870Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 21 (6) :775～780 含 RGD 模体的人白细胞介素 18( IL18) 突变体的 酵母表达及其抗血小板聚集活性 卢忠民 , 　赵宝昌 (大连医科大学 生物化学和分子生物学教研室 ,大连　116027) ( ) 摘要 　利用定点突变及 DNA 重组技术 ,在人白细胞介素 18 IL18 cDNA 序列中插入 GGC 序列 ,使 IL18 第 39 位精氨酸残基和第 40 位天冬氨酸残基之间插入一个甘氨酸残基 ,从而构建了 RGD 模 体. 此重组的 cDNA 序列构建入表达质粒 pPIC9K, 并转化 Pichia pastoris 酵母 GS115 ,利用表达系统 进行了高效表达. 用 Sephadex G100 凝胶过滤纯化表达产物 ,获得初步纯化的蛋白. 对该蛋白进行 了血小板聚集抑制实验和对 GP Ⅱb Ⅲa 与 Fn 结合的抑制实验. 含 RGD 模体的重组 IL18 ( IL18 RGD) 显示了较强的体外抑制血小板聚集活性 , IC = 88 μ 50 molL ; 并具有与 GP Ⅱb Ⅲa 的竞争结合 活性 , IC = 80 μ γ 50 molL. 该含有 RGD 模体的重组 IL18 仍保存对 PBMC 诱导产生 IFN 能力. 结果 表明 ,此 IL18 RGD 嵌合体在具有抗炎 ,抗感染的同时增添了新的抑制血小板聚集功能. 关键词 　IL18 , RGD 模体 , 毕赤酵母 , 血小板聚集 中图分类号 　Q781 Expression of Human Interleukin18 Mutant Containing RGD Motif in Yeast and Its Inhibitory Effect on Platelet Aggregation LU ZhongMin , ZHAO BaoChang ( Department of Biochemistry and Molecular Biology , Dalian Medical University , Dalian 　116027 , China) Abstract 　Using sitedirected mutagenesis and DNA recombinant technology , GGC fragment was inserted into human IL18 cDNA. The mutated IL18 cDNA was constructed into plasmid pPIC9K, thereafter transformed into Pichia pastoris GS115 and efficiently expressed. A Glycine resid