survivin及环氧化酶-2在膀胱移行细胞癌组织中表达及其相关性.doc

survivin及环氧化酶-2在膀胱移行细胞癌组织中表达及其相关性 　 作者：刘洁　庄乾元，余沁楠，窦启锋，张英杰 【摘要】 目的 探讨膀胱移行细胞癌组织中凋亡抑制蛋白survivin和环氧化酶-2(cox-2)的表达与肿瘤生物学行为之间的关系及其二者的相关性。方法 应用免疫组化Envision法，检测42例膀胱移行细胞癌组织标本和10例非肿瘤正常膀胱组织(正常对照组)中survivin和cox-2的表达。结果 42例膀胱移行细胞癌组织中survivin和cox-2表达的阳性率分别为78.6%和81.0%，正常对照组中均未见表达；survivin表达强度与肿瘤分期及复发呈正相关关系(Plt;0.05)，而与肿瘤分级无关(Pgt;0.05)；cox-2表达强度与肿瘤分级和分期呈正相关关系(Plt;0.05)，而与肿瘤复发无关(Pgt;0.05)；survivin和cox-2在膀胱移行细胞癌中的表达密切相关(rs＝0.327,Plt;0.05)。二者的表达与患者的性别、年龄、术时肿瘤的大小、数目及部位无关(Pgt;0.05)。结论 Survivin和cox-2在膀胱移行细胞癌组织中普遍表达，且表达密切相关，二者可能在膀胱癌的发生、发展过程中起重要作用，并与浸润关系密切。 【关键词】 膀胱癌；移行细胞；survivin；环氧化酶-2；免疫组织化学 survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitor apoptosis protein, IAP)家族的成员,是目前已知最强的抑制凋亡因子。主要通过抑制半胱天冬蛋白酶3(caspase-3)和半胱天冬蛋白酶7(caspase-7)的活性而抑制细胞凋亡［1］。环氧化酶-2(cyclooxygenase-2, cox-2)为诱导酶,生理状态下多数细胞中不存在,只有在细胞受到炎症刺激、组织损伤或细胞恶性转化时表达增强，且与肿瘤的浸润、转移、细胞凋亡等特性有关。本文探讨survivin和cox-2在膀胱移行细胞癌中的表达和临床病理特征之间的关系及二者的相关性。 1 材料与方法 1.1 一般材料 收集新乡医学院第一附属医院2002年3月-2004年8月归档膀胱移行细胞癌手术切除石蜡标本42例，均经病理科资深医师核实。病理分级Ⅰ级15例，Ⅱ级17例，Ⅲ级10例；临床分期Tis-T1期15例，T2-T4期27例；男性34例，女性8例，年龄35-93岁，平均62岁；原发肿瘤29例，复发13例；术时肿瘤直径小于3 cm者27例，大于等于3 cm者15例；术时肿瘤部位(肿瘤多发者按相应部位计入)左侧壁19例，右侧壁17例，顶壁10例，膀胱底、颈及三角区9例；术时可视肿瘤单发者28例，多发14例；临床病历资料均完整。另取10例膀胱部分切除之正常膀胱黏膜为正常对照。 1.2 主要试剂 survivin兔抗人多克隆抗体(美国Santa Cruz公司)；cox-2鼠抗人单克隆抗体、通用型Envision试剂盒PV-6000、显色剂DAB均购自北京中山生物技术有限公司。 1.3 方法 采用免疫组化Envision法，严格按照Envision试剂盒所附说明书进行操作。一抗cox-2为工作液可直接滴加，survivin稀释至1∶100。切片常规脱蜡至水，3%(体积分数)H2O2室温封闭10 min，微波抗原修复，10%(体积分数)羊血清室温孵育15 min，分别滴加cox-2、survivin一抗，Envision试剂盒A液、B液，DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片，PBS替代一抗作阴性对照。 1.4 结果判定标准 采用双人双盲随机阅片，对染色结果进行定性和半定量分析。survivin染色阳性以胞核和胞浆内出现棕色颗粒，cox-2染色阳性以细胞胞浆内出现棕色颗粒为准。判定方法［2］：在400倍光镜下至少观察5个视野，根据免疫组化染色强度及阳性细胞数量进行半定量评分，分别记0-3分，其中染色强度以多数细胞呈色反应为准。不着色为0分，浅棕黄色为1分，棕黄色为2分，深褐色为3分。阳性细胞数＜10%记为0分，10%-45%为1分，46%-65%为2分，gt;65%为3分。染色强度及阳性细胞数得分相乘，0为阴性(-)，1-2分为弱阳性(+)，3-4分为阳性()，5-6分为强阳性()。 1.5 统计学处理 组间率的差异用χ2检验，不满足χ2检验条件时用Fishers确切概率法；等级资料的相关性分析用Spearman等级相关。检验水准均为α=0.05，使用SPSS10.0统计软件完成。 2 结 果 2.1 免疫组化染色结果 survivin蛋白染色主要表达于癌细胞胞核内(图1A)，高分级时可见核、浆共染甚至胞膜着色(图1B)，胞核内棕色颗粒呈均匀性分布或点片状浓集。cox-2蛋白染色表达于癌细胞胞浆，部分