抗体药物的我国生物制药产业化发展前景[].docVIP

Therapeutic Antibodys Based Cancer Therapy 基于抗体药物的我国生物制药产业化发展前景 陈志南 第四军医大学细胞工程研究中心/细胞生物学教研室 肿瘤生物学国家重点实验室，西安，710032 摘要：抗体工程药物是生物技术及其生物药物最重要的部分之一，它是以基因工程、细胞工程、发酵工程为工艺研发的生物技术产品，也是全球生物技术领域产业化最为成功的产品，它们集成了20世纪50年代以来生命科学发展最前沿的成果和生物工程最关键的技术，是生物制药实现产业化的重要标志。。抗体生产制备不仅提供现代生命科学研究的重要工具，在基因和蛋白质的结构和功能研究方面有着不可或缺的作用，同时更是生物制药领域的主要组成部分。 抗体作为一个特异的接头分子是链接基因组蛋白组的重要工具，它介导了靶分子之间的相互作用并发挥效应。目前，全球单克隆抗体已多于100,000种，工程抗体多于1,000种，诊断和治疗用抗体约500种，正在进行临床的抗体有100余种。；针对血管表皮生长因子（VEGF）的抗体Avastin，使晚期结肠癌患者的生存期平均延长了5个月，FDA认为它几乎对所有的晚期结肠癌患者都有帮助，因此被批准作为晚期结肠癌的一线用药。该类药物一经开发就倍受关注。 1 抗体工程的技术现状及发展趋势 1.1 抗体高通量、大规模、功能化制备技术 高通量抗体制备技术的发展十分重要。常见的方法如杂交瘤-快速筛选技术，工程抗体-抗体库和人记忆B细胞分选技术。近年来，Mathias Uhlen建立了高通量的单一性多克隆抗体制备技术。Elisabetta T改进了人记忆B细胞分选技术，用CpG寡核苷酸增加了B细胞永生化率，从而使单克隆抗体制备更加快捷有效。EPITOMIC公司发展了兔杂交瘤技术，克服了鼠杂交瘤的缺点，获得更多的低丰度及磷酸化蛋白质抗体；Hamers率先进行了骆驼抗体的研究，只含有重链的抗体同样具有抗体功能，在中和毒素和酶功能拮抗等方面具有较好的发展前景；大容量甚至超大容量非免疫人抗体库技术的发展，使高通量筛选任何抗原的人抗体成为可能。 过去，用常规免疫和融合免疫方法很难制备针对高度保守抗原稳定的单克隆细胞株，主要是因为初级GC形成和调节过程中自身反应性B细胞的早期清除作用。可溶性抗原直接连接到高亲和力抗原特异的GC的B细胞导致调亡并引起克隆缺矢的快速发生，证实了自身活性B细胞的早期清除作用，B细胞表达Bcl-2转基因鼠同结合多位点重复免疫RIMMS）方法相结合可进一步增强对保守抗原的MAbs的产生。同常规方法制备单克隆抗体相比，RIMMS有很多优点：采用结合多位点重复免疫RIMMS方法制备高亲和力的mAbs仅需要1-2只小鼠和少量的抗原（400ng-3μg位点）或DNA（2.5-100μg/位点）RIMMS还免除了免疫过程中试血过程迄今为止已经建立了快速制备包括合成肽、重组蛋白、细胞提取物、连接复合物以及体内DNA免疫后表达蛋白等多种免疫原mAbs的方法, 并广泛用于ELISA、免疫沉竞争性联免疫印渍分析、免疫等方面的研究。今后，在阐明RIMMS机制的基础上，使用RIMMS方法，通过转染并鉴定可能进一步增加融合效率的其他细胞周期调控和信号蛋白，进一步澄清早期抗原驱使的体细胞超突变和亲和力成熟过程。由于它们与成熟记忆细胞的调节和产生有关，耐受或自身免疫紊乱机制可得以澄清。RIMMS也为构建免疫B细胞的组成多样化的噬菌体呈现库提供一条新的途径，在细胞空表达蛋白功能研究有广阔的应用前景。因此，将消减免疫、RIMMS的方法与DNA免疫和细胞免疫的方法相结合，建立一种快速制备高亲和力抗体的方法，将大大缩短单抗制备的周期。 大规模培养。2007年销售额排名前列的6类生物技术药物中，有5类是由动物细胞表达生产（肿瘤治疗抗体类、抗TNF-α抗体类、EPO类、β干扰素类、凝血因子类），仅胰岛素类药物是由大肠杆菌和酵母表达的。欧美国家哺乳动物细胞表达产品种类占60%-70%，市场份额占65%以上。虽然该体系也存在着产率低、某些糖基化产物不稳定、不易纯化、费用昂贵和自动化水平低等不足，但是完整抗体分子量大、二硫键多、糖基化位点多、空间结构复杂，只有使用动物细胞表达系统，产业化才能成为可能。 哺乳动物细胞表达生物技术产品大规模高效培养技术是生物医药产品主要的生产方式和关键“瓶颈”技术。目前，国际上该项技术发展较快，已趋成熟，以默克公司为代表的流加培养生产规模达10,000L以上，以贝尔公司为代表的灌流培养生产规模达200L以上，蛋白表达浓度为0.5-2g/L；我国在该技术领域起步较晚，基础较差，但近年来经过努力，已经实现了该项技术的突破，尤其是“十五”期间组成了以第四军医大学，华东理工大学，中国科学院，中国医学科学院，军事医学科学院组成的项目组，顺利