1柑橘木虱内生细菌的16SrRNA鉴定.docVIP

分类号： 　　　　　　　　 单位代码：10389 密 级： 学　　号：11017 福建农林大学硕士学位论文 学 科 门 类：理学 一级学科名称：生物学 二级学科名称：微生物学 研 究 方 向：微生物应用与基因工程 研 究 生： 指 导 教 师：刘波 研究员 完 成 时 间：二O一年月  M.S. Thesis of Fujian Agriculure and Forestry University The study of endophytic bacteria inside Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama Subject Category: Science Primary Subject: Biology Secondary Subject: Microbiology Study Field: Applied Microbiology and Genetic Engineering Candidate: Yang Jin Xia Advisor: Prof. Dr. Liu Bo Vice-prof.Dr.Ruan ChuanQing Submitted Time: April, 2013  独创性声明 本人声明，所呈交的学位（毕业）论文，是本人在指导教师的指导下独立完成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位（毕业）论文作者亲笔签名：　　　　　　　日期：　 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位（毕业）论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅; 学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 　　　　　　　　　　　　保密，在　　年后解密可适用本授权书。　□ 　　　　　　　　　　　　不保密，本论文属于不保密。　　　　　　□ 学位（毕业）论文作者亲笔签名：　　　　　　　日期： 指导教师亲笔签名：　　　　　　　　　　　　　日期  中文摘要 I Abstract III 第一章 绪 论 1 1 研究背景 1 1.1 柑橘黄龙病的危害 1 1.2 柑橘木虱对黄龙病的传播作用 1 1.3 柑橘黄龙病/木虱的防治问题 1 1.4 柑橘木虱内生菌的研究进展 2 1.4.1 昆虫内共生菌对宿主的影响 2 1.4.2 木虱内生菌研究现状 3 2 研究方法与技术 4 2.1 正交试验优化木虱内生细菌培养基 4 2.2 16S rRNA基因序列分析的应用 4 2.3 实时荧光定量RT-PCR技术 5 2.4 TaqMan探针实时荧光定量的应用 6 3 本研究的目的和意义 6 4 技术路线 8 第二章 柑橘木虱内生细菌的鉴定 9 1 柑橘木虱内生细菌的16S rRNA鉴定 9 1.1 柑橘木虱内生菌DNA提取方法的筛选 9 1.1.1 引言 9 1.1.2 材料和方法 9 1.1.3 结果与分析 11 1.1.4 讨论 13 1.2 柑橘木虱内生细菌的16S rRNA鉴定 15 1.2.1 引言 15 1.2.2 材料与方法 15 1.2.3 结果与分析 16 1.2.4 讨论 21 2 柑橘木虱可培养性内生细菌的分离、鉴定 23 2.1 引言 23 2.2 材料与方法 23 2.2.1 供试样品 23 2.2.2 供试试剂 23 2.2.3 供试仪器 23 2.2.4 方法 23 2.3 结果与分析 25 2.3.1 木虱内生细菌培养基的优化筛选 25 2.3.2 柑橘木虱内生细菌的16S rDNA鉴定 26 2.3.3 柑橘木虱内生细菌生理生化鉴定 26 2.4 讨论 28 第三章 柑橘木虱内生菌与虫龄、温度及寄主植物内生菌的关系 30 1 虫柑橘木虱实时荧光定量 30 1.1 引言 30 1.2 材料与方法 30 1.2.1 试验材料 30 1.2.2 定量PCR标准样品的标准曲线的制作 31 1.2.3 不同处理后柑橘木虱实时荧光定量检测 31 1.3 结果与分析 31 1.3.1 菌株标准曲线的制备 31 1.3.2 木虱样品实时荧光定量结果与分析 33 1