Lumina 2 操作流程basic.pdfVIP

Lumina ⅡLiving Image 4.2 软件操作流程 本流程主要介绍Lumina Ⅱ的Living Image 4.2软件的应用，包括参数介绍、生物发光及荧光 二维成像的图像获取及数据分析。 一、User 设置及Initialize 1、双击桌面上 图标，打开软件，首先会提示您是否需要新建一个User ID 或者是 在下拉选项中选择一个已建好的 User ID，点击OK，则之后获取的图像文件名都以此 User ID 开头。 2 、 出 现 控 制 面 板 “ Control Panel ” 界 面 ， 首先需要进行初始化即“Initialize”，使仪器内各部件回到最初始的位置和状态， 同时 CCD 开始降温，而状态栏“System Status”则会显示实时的操作状态。当 “Temperature”由红色转成绿色时，表明仪器做好了成像前准备，可以开始用软件操 控仪器了。 二、 控制面板参数介绍 整个图像的获取过程都通过该控制面板操作，其中曝光时间Exposure Time、binning值 及光圈大小F/Shop是最为关键的参数，直接影响图像获取的质量。 1、曝光时间（Exposure time ） 1) 曝光时间决定了信号强度，曝光时间越长，信号强度越高，推荐的设定为0.5s—5min， 若曝光5min仍未看到信号，表明动物体内确实无目标信号。 2) 对于设置多少曝光时间可得到合适曝光水平的图像，软件设置了非常方便的自动曝 光即Auto exposure功能，仪器会自动检测一个合适的曝光时间以成像。自动曝光的 设置只需在Exposure time选项中点击“▼”两下，即出现 。 3) 自动曝光工作原理：软件对曝光水平设置了阈值即Target count，为达到这个阈值， 软件会对成像参数进行自动调节，点击Edit，出现Preference对话框，点击 Acquisition选项。 软件首先调节First preference，若仍未达到阈值要求则继续调节Second及Third preference。每个参数的Min和Max值都可以在参数下方的Range Values中自行设定。 2、Bin 值（Binning ） Bin 值表述的是将多少像素作为感光单元，bin 值越大则表示应用更多的像素作为一个 感光单元，因此，bin 值越大则灵敏度越高，而分辨率会有所牺牲，当信号强度较弱时 可适当增加bin 值以获取信号。 3、光圈大小（f/stop ） 光圈大小决定了光的透过量，光圈越大，穿过光圈到达CCD的光越多，面板中的数字为 F/stop 中的分母数字，因此，数字越小代表光圈孔径越大，透过的光越多，当信号较弱时 可通过增大光圈（减小数字）而增强信号探测能力。 4、视野范围（Field of View ） 视野范围用于调节观测的视野大小，共有 A/B/C/D 四档可选，分别代表不同大小的视野 范围，实验时根据一次观察小鼠个数选择合适的视野范围进行成像。 5、成像聚焦（Focus ） 成像的聚焦包含自动聚焦和手动聚焦功能，将成像物体调至位于CCD的聚焦平面，可使物 体在最后成像清晰。对于自动聚焦，只需在Subject height中填入成像物体的高度，如小 鼠为1.5cm，Focus下拉选项中选择“use subject height ”，仪器即会自动完成聚焦，获得 清晰的物体黑白图像。 三、 生物发光二维成像的图像获取 1、勾选 Luminescent及Photograph选项，则overlay选项会被自动勾选上，即软件最后呈 现的是生物发光图像和物体黑白图像的叠加图像。 2、对于如何设置曝光时间、bin 值、光圈大小参数而获得合适曝光水平的图像，软件提 供了非常方便的“Auto exposure”即自动曝光功能，使用自动曝光功能后就不需再考 虑曝光时间等参数设置多少为佳，仪器会自动调整获取合适曝光水平的图像。自动曝光 的设置只需在Exposure time选项中点击“▼”两下，即出现“Auto exposure”。 3、由于生物发光为自发光，不需激发光的激发，所