苦参碱对小鼠急性肝损伤HSC凋亡地影响.pdfVIP

洗，苏木素复染，封片。 3．2NGF表达量的分析从每只小鼠的3张标本中境下选取染色比较均匀的 一张进行病理图谱分析，每张病理标本，随机选取5个20倍视野进行拍照，照片 5．0病理图谱分析系统分析灰度并测算灰度面积，取5个视野灰 通过imageplus 度倒数乘以灰度面积得到5组数据，取5组数据的平均值进入统计。 4．CI-SMA与TUNEL双染检测HSC凋亡 4．1双染的过程免疫组化步骤如上述步骤3，DAB显色后，自来水充分冲洗， 标本中，每片标本50rq，37C下孵育2小时，取出后PBS冲洗3次，每次3分钟， 甩干后加入C液，37。C孵育30分钟取出，PBS冲洗3次，每次3分钟，甩干后加入 BClP／NBT显色，境下观察。 4．2从每只小鼠的3只标本中选取染色比较均匀的标本进行境下观察计数，从 每个标本中随机选取5个20倍视野进行计数，胞浆染成蓝色和胞核染成中黄色的细 胞为目标细胞，计数后取5个视野的平均值进入统计。 6．统计学处理 数据采用均数±标准差(X±s)表示，NGF灰度倒数乘以灰度面积的数值和 件进行NGF的表达量和HSC凋亡率的相关性分析：P0．Ol为差异有显著性。 实验结果 1．NGF免疫组化灰度分析 光镜下可见染成棕黄色的NGF阳性区沿着肝细胞存活较多的肝腺泡区分布，越临 近小叶中央，肝细胞损伤坏死越严重，NGF表达量也越少，小叶中央区由于肝细胞坏 死严重，未见明显的NGF表达，从高倍镜下可见NGF表达于肝细胞的胞浆内。空白 进作用，但不随着剂量的增加而增加。苦参碱75mg／kg组的NGF表达量最高。 表1：各组灰度倒数X灰度面积比较(X±s) F=105．433，P(O．01 表l：各组灰度倒数与灰度面积积值比较直方图 蚶 闭 宣 蜷 × 漪 河 刮 诸 夏 ■ 苦参碱100mg／kg) 7 图1：各组NGF免疫组化结果 苦参碱25mg／kg组(10X20) 苦参碱50mg／kg组(10×20) 苦参碱75mg／kg组(10x20) 苦参碱lOOmg／kg组(10×20) (图中染成棕黄色的区域为肝细胞表达NGF的阳性区域) 9 的为阳性细胞，即凋亡的HSC，单纯胞浆染成棕黄色的为没有凋亡的HSC，单纯胞 核染成蓝色的为凋亡的非星状细胞。空白组、苦参碱50mg／kg组、苦参碱75mg／kg 8．00±2．00／HP、11．38±1．69／HP，各组凋亡率随着苦参碱的剂量增加而增大， 差别具有显著性(F=37．76，尺O．01)(见表2、图2)。 表2：各组HSC凋亡率比较(i±s) F=37．76，P0．01 表2：各组HSC凋亡率比较直方图 凋 亡 室 ^ 宝 勺 _ ’ O0(30A组 ■■-■■雌 —■■■■●■■■吣 分组 苦参碱100mg／kg) 10 图2：Ⅱ一SMA与TUNEL双染检测HSC凋亡结果