第四章色谱分析技术和色谱分析仪器.ppt

检测器与分光光度计的主要差异有：①样品检测池体积只有5μl～8μl，不致于影响峰形，并做成流动式。②检测灵敏度达0.05～0.01O.D.的满度值（光度计为1.0～0.5O.D.）。为提高灵敏度，样品池做得细长。③对分光后光的单色性、波长精度要求不高，光谱宽度可在10nm，波长精度可以低至±2nm。 第三节 高相液相色谱仪 紫外及可见光检测器是目前高效液相色谱仪中最常用的检测器。它具有灵敏度和检测精度高、线性范围宽、受流量和温度波动的影响小、适用于梯度洗脱及不破坏样品等特点，是一种选择性检测器，只能用于在工作波长范围内有吸收的样品。 第三节 高相液相色谱仪 2.示差折光检测器（RID） 主要由光源系统、光路系统、接收、放大、记录系统构成。由于各种物质具有不同的折射率，一种混合物的折射率又是各组分折射率的平均值，而溶剂和样品各组分折射率存在一定差异，所以通过检测折射率的变化，就可以达到分析样品各组分的目的。 第三节 高相液相色谱仪 接照作用原理可将示差折光检测器分为反射式和偏转式两种。（1）反射式示差折光检测器：  根据菲涅尔反射原理，相分界面上反射光的强度取决于入射角和相分界面上两种介质的折射率，折射光的强度同样也受入射角和相分界面上两种介质的折射率的影响。 第三节 高相液相色谱仪 第三节 高相液相色谱仪 1 洗脱液、样品 棱镜 L2 D 接收系统 底板 样品槽 参比槽 L M2 投影系统 F M1 S 出口 (a)光路图 洗脱液或样品 不锈钢底板 棱镜 反射光（不用） 来自光源 L2 接收器 D (b)原理示意图 图5-26 反射式示差折光检测器 （2）偏转式示差折光检测器：  根据折射定律， n1sinθ1 = n2sinθ2 （5－9）  折射角θ2取决于入射角θ1和相分界面上两种介质的折射率n1、n2。 第三节 高相液相色谱仪 第三节 高相液相色谱仪 图5-27 偏转式示差折光检测器 记录仪 光电倍增管 五棱镜 光源 调零 光阑 透镜 参比 样品 反射镜 放大器 反射式液槽体积小，在3～5μl，线性范围小，为了避免出现全反射现象，需根据洗脱液和样品组分的折射率更换入射方的棱镜。偏转式的线性范围较宽，不需换液槽，稳定性好，但液槽体积大。 第三节 高相液相色谱仪 示差折光检测器是一种非选择性检测器。基本上对所有被测对象均有响应，且不破坏被测物质的性质。但灵敏度较低，不适于做痕量分析。也不适于梯度洗脱。因样品-洗脱液的折射率将随洗脱液组成变化而变化，从而产生干扰信号。 第三节 高相液相色谱仪 3.荧光检测器 某些物质在吸收了一定的光能后，会发射出频率较低、波长较长的荧光。荧光检测器就是用紫外光（称为激发光）照射样品，通过光电倍增管检测样品所发出的荧光（称为发射光），记录出色谱图的。 第三节 高相液相色谱仪 荧光检测器根据单色器的不同，分为多波长荧光检测器（由多个滤光片构成单色器）和荧光分光检测器（由光栅构成单色器）。荧光检测器在选择性和灵敏度方面优于紫外检测器。但它检测的样品必须能够被激发出荧光，也是一种选择性检测器。 第三节 高相液相色谱仪 此外，二极管阵列检测器、氢火焰离子化检测器、微量吸附热检测器等检测器也是高效液相色谱仪常用的检测器。 第三节 高相液相色谱仪 图5-28 二极管阵列检测器及其谱图 第三节 高相液相色谱仪 五、操作条件的选择 操作条件的选择除前面介绍的色谱柱参数、流动相及固定相的选择外，还包括以下几点。 第三节 高相液相色谱仪 1.流动相的流量 提高流量可缩短分析时间，但会降低分离度，增加柱压。应根据样品的性质、样品量大小、分离目的、选择的固定相和流动相以及色谱柱的尺寸等因素综合考虑。分析时，一般选10ml/min以下。制备时，流量可选大一些。 第三节 高相液相色谱仪 2.柱温 一般在室温下进行。据统计，约有70％以上的分析是在室温下进行的。当然提高温度可提高分析速度，但也会降低分离度。因此在高效液相色谱仪中，一般均通过流动相的选择而不是柱温的调整来提高分离能力。高温对固定相的影响也应充分考虑。 第三节 高相液相色谱仪 3.压力 高效液相色谱仪分析速度提高的原因之一是采用了高压。一般可在3.43～34.32MPa之间选取，最高不能超过49.03MPa。高压虽可增加分离速度，但会带来密封、固定相的强度等问题。除高压技术外，也可以通过采用高效固定相，缩短柱长的努力来提高分析速度。 第三节 高相液相色谱仪 4.进样量