扩增产物的毛细管电泳分离.PDF

第二节 扩增产物的毛细管电泳分离 电泳 （electrophoresis ）是指在电解质溶液 中，带电颗粒在外加电场的作用下，以不同的 速度向着与其电荷相反的电极移动的现象。 利用电泳现象对某些化学或生物物质进行 分离、分析或提纯的方法和技术叫电泳技术。 高效毛细管电泳(HPCE) Capillary Electrophoresis System 分离系统 Laser 36 cm Capillary filled with polymer solution Detection 检测系统 window - + 5-20 kV (cathode) (anode) Outlet Inlet Buffer Buffer 数据处理系统 Data Sample tray moves automatically beneath the Acquisition 进样系统 Sample cathode end of the capillary tray to deliver each sample in succession Butler, J.M. (2001) Forensic DNA Typing, Figure 9.3, ©Academic Press 高效毛细管电泳仪的特点 1.电泳前PCR产物需要预处理 2.电泳前自动灌胶 3.电进样方式 4.高压电源（15000V） 5.毛细管柱 6.分离介质：粘性多聚溶液 7.荧光检测系统 8.自动化检测和分析 PCR产物预处理 • PCR产物在毛细管电泳之前，加入10倍体积 的甲酰胺处理，使DNA变性。 • 变性剂甲酰胺或尿素可以和DNA中的碱基 形成氢键，阻止了DNA互补双链的形成。 • 甲酰胺处理过的DNA为单链DNA分子。 • 甲酰胺：LIZ500 （分子量内标）= 49:1 • 甲酰胺LIZ混合物：PCR产物=9:1 • 95 ℃→0 ℃ （冰上） 高效毛细管电泳(HPCE) 2014-04-02 ABI 3100 16-capillary array 泵胶系统 • 电进样方式