抗HLJ1单克隆抗体的制备及抗原检测方法的建立.PDF

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, July 25; 24(7): 1293-1299 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 技术与方法 抗HLJ1 单克隆抗体的制备及抗原检测方法的建立 1 2 1 3 2 2 2 1 1 林翔 , 马骊 , 王菊芳 , 谭永法 , 温茜 , 罗微 , 苏瑾 , 林影 , 王小宁 1 华南理工大学生物科学与工程学院, 广州番禺大学城 510006 2 南方医科大学生物技术学院分子免疫学研究所, 广州 510515 3 南方医院肝胆外科, 广州 510515 摘 要: 为制备抗人肝脏DnaJ-like 蛋白(Human liver DnaJ-like protein, HLJ1)的单克隆抗体, 并建立免疫组化和双抗体 夹心 ELISA 检测 HLJ1 的方法, 采用淋巴细胞杂交瘤技术, 获得两株能稳定分泌抗 HLJ1 单克隆抗体的杂交瘤细胞株 A C 和 C C 。经鉴定, 两株单抗的亚类均为IgG1, 并且效价高、特异性好。以单抗A C 和 C C 作为一抗, 对人胎肝 4 7 4 8 4 7 4 8 组织石蜡切片进行免疫组化染色, 结果表明, 两株单抗均为阳性染色, 且HLJ1 主要定位于胎肝细胞的胞浆。选取A4C7 进行HRP 酶标记, 并以HRP- A C 作为酶标抗体, 以C C 作为包被抗体, 建立双抗体夹心ELISA 方法, 并进行棋盘滴 4 7 4 8 定确定抗体的最佳工作浓度。该检测方法的线性范围是 15~750 ng/mL, 灵敏度下限达 15 ng/mL, 特异性良好。所建立 的免疫组化和双抗体夹心ELISA 法可用于快速、灵敏地检测组织及血清中的HLJ1 蛋白, 为HLJ1 的肿瘤相关性研究提 供了有力的工具。 关键词: HLJ1, 单克隆抗体, 双抗体夹心 ELISA, 免疫组化 Preparation of the anti-HLJ1 Monoclonal Antibodies and Establishment of Method for Detection of the Antigen 1