生物分离工程)技术八凝胶色谱技术).pptVIP

* * 3、凝胶装柱。 ①将层析柱垂直装载支架上，将下端输液管夹紧； ②向柱中加入约1/3体积的0.9％NaCl溶液； ③将一细玻棒伸入柱内，靠近管内壁，顺着玻棒缓慢的向管内加入混匀的凝胶溶液； ④凝胶加至层析柱顶端约3cm时，打开柱下端输液开关，使流速控制在0.25-0.5ml/cm2·nim。 ④连续而缓慢的加凝胶直到稳定在离管口约5cm处。 （防止空气进入凝胶床） 4、样品上柱及洗脱 ①加样量的控制 　　　分析：1-2ml/100ml床体积， 　　　制备：10-30ml/100ml床体积 ②洗脱液的选择：洗脱液应与浸泡凝胶时所用的溶液一致，否则由于更换溶剂，凝胶体积会发生变化而影响分离效果。 ③凝胶层析加样操作示意图 ④洗脱与自动收集记录 ⑤凝胶柱层析实物连接 ⑥凝胶层析中的分离行为 凝胶层析加样操作示意图 1、平衡好的层析柱。 2、沿管壁将样品溶液小心加到凝胶床面上，应避免将床面凝胶冲起。 3-4、打开下口夹子，使样品溶液流入柱内，同时收集流出液， 5-7、当样品溶液流至与胶面相切时，夹紧下口夹子。按加样操作，用1mL洗脱液冲洗管壁2次。 8-9、最后加入3—4mL洗脱液于凝胶上。 10、连接柱层析系统，自动收集记录。 洗脱与自动收集记录 凝胶柱层析实物连接 凝胶层析中的分离