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单质粒Tet-on系统的构建、细胞验证及转基因小鼠模型的建立
目 录
摘要
英文摘要
1 前 言1
1.1 本课题研究背景及理论依据1
1.2 四环素调控系统的概述3
1.2.1 四环素调控系统的作用机制3
1.2.2 四环素调控系统的特点5
1.2.3 四环素基因表达调控系统的研究新进展6
1.2.4 四环素调控系统细胞模型的研究进展7
1.2.5 四环素调控系统的应用前景7
1.2.6 单质粒模式的四环素调控系统的建立7
1.3 转基因动物的概述8
1.3.1 转基因动物制作的原理及方法8
1.3.2 转基因动物的鉴定技术 12
1.3.3 转基因技术在动物生产上的应用 13
1.3.4 研究转基因动物存在的问题 14
1.4 研究目的与意义 15
2 材料与方法 16
2.1 单载体的构建 16
2.1.1 试验材料 16
2.1.2 试验方法 16
2.2 细胞水平验证 17
2.2.1 试验材料 17
2.2.2 试验方法 18
2.3 转基因动物水平验证 20
2.3.1 试验材料 20
2.3.2 试验方法 20
3 结果与分析 26
3.1 单载体的构建 26
3.1.1 单载体构建策略 26
3.1.2 单载体的酶切鉴定 27
3.2 单载体细胞水平验证 27
3.2.1 加Dox 诱导pTRE-Tight-rtTA-EGFP 的表达 27
I
3.2.2 加Dox 诱导pTRE-Tight-rtTA-Luc 的表达 28
3.3 单载体转基因动物水平验证 29
3.3.1 转基因小鼠的制备 29
3.3.2 转基因小鼠的PCR 检测 29
3.3.3 转基因小鼠的Southern blotting 检测 30
3.3.4 Dox 诱导转基因小鼠的检测 31
4 讨论 32
4.1 四环素调控系统单载体模型的建立 32
4.2 四环素调控系统在细胞上的应用 33
4.3 四环素调控系统在转基因小鼠上的应用 33
4.4 本研究的意义和后续工作 34
5 结论 36
参考文献 37
附录 43
攻读硕士学位期间发表的学术论文 51
II
CONTENTS
Abstract in Chines
Abstract in English
1 Introuction1
1.1 The research background and theoretical basis in this topic 1
1.2 The overview of the tetracycline regulation system3
1.2.1 The mechanism of action oftetracycline r
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