实时荧光定量pcr原理定义在pcr反应体系中加入荧光基团.docVIP

一、实时荧光定量PCR原理 （一）定义：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 。 （二）实时原理 1、常规PCR技术： 对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析无法对起始模板准确定量，无法对扩增反应实时检测。 2、实时定量PCR技术： 利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析? 3、如何对起始模板定量？ ?通过Ct值和标准曲线对起始模板进行定量分析. 4、几个概念： （1）扩增曲线 ： （2） 荧光阈值：? （3）Ct值：????? CT值的重现性： ? 5、定量原理： 理想的PCR反应：?? X=X0*2n 非理想的PCR反应：? X=X0 (1+Ex)n????? n：扩增反应的循环次数????? X：第n次循环后的产物量????? X0：初始模板量????? Ex：扩增效率 5、标准曲线? 6、绝对定量 1）确定未知样品的 C(t)值 2）通过标准曲线由未知样品的C(t)值推算出其初始量 ? 7、DNA的荧光标记：  ? 二、实时荧光定量PCR的几种方法介绍 方法一：SYBR Green法 （一）工作原理 1、SYBR Green? 能结合到双链DNA的小沟部位 ???? ?2、SYBR G