II型草鱼呼肠孤病毒VP4、VP35蛋白的多克隆抗体制备及其免.pdfVIP

第 40 卷 第 3 期 水 产 学 报 Vol. 40, No. 3 2016 年 3 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Mar., 2016 文章编号: 1000–0615(2016)03–0355–08 DOI: 10.11964/jfc.20151110160 Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒VP4 、VP35蛋白 多克隆抗体制备及其免疫原性分析 1 1 1, 2 * 宗乾坤 ， 张 也 ， 吕利群 (1. 上海海洋大学水产与生命学院，农业部淡水种质资源重点实验室，上海 201306; 2. 淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心，湖北 武汉 430070) 摘要：为建立针对Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV) 的血清学检测方法,分别构建了GCRV JX02 株外衣壳蛋白VP4 、VP35 的原核重组表达质粒PGEX-4T-3-S6 、PGEX-4T-3-S11 ，用 纯化的重组蛋白rVP4 、rVP35分别免疫小鼠制得相应的多克隆抗体，用间接ELISA 方法 测定2 种抗体的效价，用Western Blot 鉴定抗体的特异性。SDS分析细菌表达的 rVP4 、rVP35 大小分别约为98ku和61ku ，且都主要以包涵体的形式存在；间接ELISA方法 5 6 测定制备的抗体效价分别约为1:4×10 和1:10 ；Western Blot结果显示，制备的2种多克隆 抗体都既能够识别原核表达的重组蛋白，又能够识别JX02毒株上的对应蛋白，并且发现 感染JX02 的草鱼血清中存在结合VP4 、VP35 的相应抗体。本研究制备的2种多克隆抗体 都具有良好的生物学特性，并且这2种重组蛋白作为相应抗体捕获原可以用于通过检测 抗病毒抗体来确诊草鱼是否感染Ⅱ型GCRV 。本研究将为GCRV 主要流行株血清学检测 方法的建立以及VP4 、VP35蛋白相关功能研究奠定基础。 关键词: Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒；原核表达；VP4蛋白；VP35蛋白；多克隆抗体 中图分类号: Q 511 ；S 965.112 文献标志码: A 草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus, GCRV)是 毒株，经鉴定其与HZ08株基因序列同源性高达 我国科学家分离的第一株鱼类病毒,隶属于水生 98%[13] 。当前国内主要针对Ⅰ型GCRV开展研 [1] [14] 呼肠孤病毒属(Aquareovirus ) ，该病毒能够引起 究 ，研究也主要是关于各基因节段及其编码蛋 我国主要的淡水养殖品种草鱼(Ctenopharyngodon 白的功能和作用，而对于Ⅱ型GCRV却知之甚 idella)在育种阶段暴发出血病，并且致死率高， 少。根据全国主要草鱼养殖区流行病学调查结 [1-