不同去核方法对猪手工克隆重构胚发育效果的影响.pdfVIP

and 2015年篥51卷第9期 繁魏生理·ReproductionPhysiology 不同去核方法对猪手工克隆重构胚发育 效果的影响 吕玲燕1，陆杏蓉2，孙俊铭2，潘翠玲1，崔奎青妒，谢炳坤卜 (1．广西壮族自治区畜牧研究所，广西家畜遗传改良重点实验室，广西南宁530001； 2．广西大学亚热带生物资源保护利用国家重点实验室，广西南宁530005) 摘 要：为探讨不同去核方法对猪手工克隆(HMC)重构胚发育效果的影响，本研究比较了盲切法，第一极体 (Phi)定位法及脱羰秋水仙碱(DM)辅助去核法3种不同的去核方法的去核效率及HMC胚胎发育的影响。结果 DM 表明：第一极体定位法和DM辅助去核法的整体去核效率显著高于盲切法去核法(PO．05)；应用0．4斗g／mL 处理卵母细胞60min的突起率、整体去核效率显著高于其他浓度和时间处理组(PO．05)；DM辅助去核与pbl定 位去核法2种不同去核方法对HMC重构胚的发育效果的影响差异不显著。本研究表明，添加适量的DM可以提 高徒手克隆去核效率，且对后期重构胚发育没有显著影响。 关键词：去核方法；猪；手X-克隆；发育效果 中图分类号：$828．3 文献标识码：A 文章编号：0258—7033(2015)09—0016—05 自从“多莉”问世后，体细胞核移植技术不断向 了健康的克隆小鼠。Dan等【71用DM辅助羊卵母细胞的 前发展，并在优秀动物个体复制、濒危动物保护以及 去核，从而改善羊重构胚胎的发育潜能。Li等【8I用DM 细胞分化研究中取得一些举世瞩目的成就，它已然 诱导去核的猪卵母细胞为受体的重构胚移植后成功 成为生命科学研究的热点领域之一。由于猪在生 获得了健康克隆小猪。由此可见，DM诱导去核的细 理、形态上与人的器官非常相似，近年来应用猪的体 胞质能够支持供体全基因组的重编程，可以用于体 细胞核移植技术研制人类基因疾病的动物模型，以 细胞核移植。本试验探讨不同去核方法对去核效率 及生产基因敲除猪用于人异种器官移植成为猪核移 的影响，以及不同的去核方法对猪手工克隆重构胚 植相关研究的热点方向之一IlI。就猪的体细胞核移 发育潜能的影响，从而优化猪HMC的技术体系。 植而言，成功克隆出小猪的概率总体只有1％，极大 1材料与方法 制约核移植克隆猪相关工作的开展[3_“。卵母细胞的 成功去核是克隆成功的第1步，影响去核的效率也是 1．1 主要试剂耗材培养液中的TCM一199粉剂、 多方面的，如去核的干净程度、对卵胞质损伤类型及 程度。DM具有破坏微管稳定、干扰染色体的正常分 离和纺锤体的功能，可以促使激活卵母细胞核内的 Sigma公司，其余的化学试剂如无特殊说明均购自美 所有染色质随同极体一起排出，从而获得核移植所 Aldrich公司。配制溶液的二三蒸水均为南宁本 国Sigma 450(San 需的受体胞质，因此被用于卵母细胞的去核[51。 地水。融合槽型号：BTX Diego，USA)，卵母 细胞成熟培养皿：35mm及60mm塑料平皿(BD Gasparrini等161用DM进行化学诱导去核，以去核后小 鼠卵母细胞为受体重构胚胚胎进行移植后成功获得 Falcon，USA)自制卵母细胞切割刀，胚胎培养皿：四 孔板(N