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—８４ — 江苏农业科学　２０１６ 年第４４卷第１０期 麻　锐，冯　凯，姜　锐，等．不同生长年限园参根的双向电泳分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０１６，４４（１０）：８４－８８． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１６．１０．０１９ 不同生长年限园参根的双向电泳分析 麻　锐，冯　凯，姜　锐，陈　伟，靳雯棋，徐晓浩，毕英飞，孙立伟 （北华大学化学与生物学院，吉林吉林１３２０１３） 　　摘要：为了解园参根在生长过程中的蛋白质组学变化，利用双向电泳技术分离１～５ 年园参根蛋白，重点分析园参 根生长（３年）、成熟（５ 年）之间的蛋白质组学差异，并利用ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ鉴定差异显著的８１ 个蛋白点。结果表 明：有１９个差异蛋白点在成熟期表达量下调，６２个蛋白点表达量上调，针对其与园参根生长发育的潜在关系进行分 类与讨论；园参根在逐渐成熟的过程中与抗胁迫相关的过氧化氢酶、单脱氢抗坏血酸还原酶等，以及与能量代谢相关 的ＡＴＰ酶、甘油醛－３－磷酸脱氢酶等表达量增加，而与生长相关的果胶酯酶表达量减少，这些蛋白质的变化对于探 讨人参根的生长发育规律有重要意义。 　　关键词：园参；生长年限；双向电泳；蛋白质组学 　　中图分类号：Ｓ５６７．５＋１０．１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１６）１０－００８４－０４ 　　人参（Ｐａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇ ＣＡＭａｙ，Ａｒａｌｉａｃｅａｅ）为五加科多年 块，用液氮研磨成精细粉末后存于－８０℃备用。 生草本植物，其根部作为补气圣品，有悠久的药用历史。人参 １．２　蛋白提取 的品质多受其生长年限的影响，需要生长５ 年以上才可收获 园参根蛋白质的提取方法采用改进后的酚提法［４］。取 药用。研究表明，人参根中含有多种皂苷、挥发油、多糖、蛋白 ０．２ｇ液氮研磨的园参根粉末，加入７ 倍体积、含０．０７％ － β 质等物质，具有调节中枢神经系统、促进大脑对能量物质的利 巯基乙醇的丙酮溶液（－２０℃预冷），－２０℃静置 １ｈ后，于 用、改善心脏功能、降低血糖、增强人体免疫力、抗肿瘤等作 ４℃、１５０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，弃上清，重复３ 次；将沉淀置 用［１］，并且这些物质含量会随着参龄的增长而递增，进入成 于４℃ ，待丙酮完全挥发后，加入４ 倍体积样品裂解液｛含 熟期（５ 年）后趋于稳定［２－３］。也就是说，进入成熟期的人参 ７ｍｏｌ／Ｌ 尿素、２ｍｏｌ／Ｌ硫脲、２％３－［（３－单酰胺丙基）－二 质量好，药效价值显著，并且在这过程中的生理生化转变皆可 乙胺］－１－丙磺酸（ＣＨＡＰＳ）、１％植物蛋白抑制剂｝，旋涡混 由基因调控的蛋白质差异表达而得以反映。因此，研究人参 匀，１００Ｗ超声４０ｍｉｎ后，于 １５０００ｒ／ｍｉｎ、４℃离心 １５ｍｉｎ， 根生长期与成熟期的蛋白质组学变化对于揭示人参生长发育 收集蛋白上清液；加入等体积Ｔｒｉｓ－饱和酚（ｐＨ值 ＝７．８）振 特性有重要意义。 荡３０ｍｉｎ，于４℃、１００００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，取中层、下层，加 近年来，随着蛋白质组学的快速发展，高通量、高灵敏度 ７倍体积含０．１ｍｏｌ／Ｌ 乙酸铵的甲醇溶液沉淀过夜，于４℃、 的双向电泳和质谱等蛋白质组学技术已经可以快速鉴定上千 １５０００ｒ／ｍｉｎ离心 １５ｍｉｎ，弃上清；沉淀用含０．１ｍｏｌ／Ｌ 乙酸 种蛋白质，为监测植物生长代谢过程中蛋白质的动态变化提 铵的甲醇溶液洗涤２遍，再用预冷的丙酮洗涤３遍，将沉淀物 供了可能。本研究应用比较蛋白质组学技术，建立不同生长 干燥，于 －８０ ℃贮存。参照 Ｂｒａｄｆｏｒｄ 的方法进行蛋白质 年限园参的蛋白质表达图谱，分析其差异表达蛋白的功能，探 定量［５］。 讨园参参根的生长发育规律，对认识园参药效形成有一定 １．３