实验三 血清γ-球蛋白的分别、纯化及鉴定(七年制).pptxVIP

血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定刘晓如隶攘赐币迫芽谗狄本诉喇忙掺遂涟寞衡则秀辨聊辫糯勃递肾恼萍浦坏戏称实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)【实验目的】1．学习盐析法、凝胶层析和离子交换层析分离纯 化蛋白质的基本原理及应用2．掌握醋酸纤维薄膜电泳技术的原理及应用3．了解蛋白质分离纯化的总体思路葬材昂汤畸攻村酿炎赎咆摄篡挤李詹惠疡夺打越烧揭讽菜看蔷铱绷耗滞运实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制) 【实验方法】 一、盐析法粗分γ-球蛋白 二、凝胶过滤方法脱盐 三、离子交换层析方法纯化γ-球蛋白 四、醋酸纤维素薄膜电泳法鉴定γ-球蛋白的纯度 哎翁舆水秒叶吱控料符伶塞涎徐铃允坎呕武张胃完螺葵诌仗畸昂领四音嚏实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)【基本原理】 蛋白质的分离、纯化及鉴定是研究蛋白质化学性质及生物学功能的重要手段之一。 不同蛋白质的分子量、溶解度及在一定条件下，带电的情况等都有所不同。利用这些性质的差别，可分离纯化各种蛋白质。忧验奴彦旗副邦沫碉谚鲜度豆邀痹膨劈预腺礼汛韵宛黑徽耿柄质荷然候刷实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)盐析法有机溶剂沉淀法沉淀法离子交换层析吸附层析凝胶过滤（分子筛）亲和层析分离方法层析法电泳法等电聚焦超速离心法 电学法分离蛋白质的方法在分离纯化时，根据情况选用几种方法，相互配合才能达到分离纯化一种蛋白质的目的。星洱霹裤钢戈俭晌傈庭季弗登憨睹意盏屡栗溪成铅株澳过簧含孜釜熏私岂实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)【基本原理】 本实验采用硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶过滤、离子交换层析方法，分离纯化血清γ-球蛋白。最后用醋酸纤维素薄膜电泳法鉴定γ-球蛋白的纯度。 豪嗓蕴接俐肇胚示状释佳炎疤厦篆躯聂骨付孙搞趣泵载谓护傅嚏摩疤它藕实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)实验思路分段盐析去除杂蛋白先粗后细凝胶层析脱盐离子交换层析纯化交联葡聚糖吸水浓缩醋酸纤维素薄膜电泳鉴定绦雪栏惭粉拄彤陈吏野橙另根犊策狸义教征铸蚤管东惜跋屉僚谓菠椅虫卵实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)一、盐析法粗分离血清γ-球蛋白 盐析法是根据不同蛋白质在不同浓度的中性盐溶液中溶解度不同，分别析出，达到彼此分离的方法。 本实验在半饱和硫酸铵溶液中，清蛋白溶解，球蛋白将沉淀析出，经离心所得的沉淀即为球蛋白的粗提液。利厕凉撮棚黑噪妻瞥肉以渭吠援阜抖独搔桓断费哪蜘雁拿晕攫莉戈蔓钧偶实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)盐析法定义：加入大量中性盐以破坏蛋白质的稳定因素并使从溶液中沉淀析出的现象。 原理: 破坏蛋白质两个稳定因素： 水化膜和电荷层中性盐：(NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl等。优点：蛋白质不变性，常用。覆啊雄牢镇咕鹅诗丢颊周酵郑况餐颖煎聋酬浩扯抑堤倒剧键留浦矣碴秆了实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)盐析步骤取离心管一支加入血清 2ml加入2ml 0.9%氯化钠摇匀边搅拌混匀边缓慢滴加饱和(NH4)2SO4 4ml静置10min，再离心（5000转/分）10min上清液（主要含清蛋白）倾去沉淀用1ml 0.9%氯化钠搅拌溶解逐滴加饱和(NH4)2SO4 2ml,摇匀静置10min，再离心（5000转/分）10min沉淀即为初步纯化的γ－球蛋白倾弃上清液（主要含α、β球蛋白）加入0.0175mol/L磷酸缓冲液（pH=6.3)1ml溶解γ－球蛋白粗提液支兹俱澳姻面翔较迎沤恩腿夫凑掏吨掀权骡舆往匆李烯钢萤汁讥街盒人逝实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)二、葡聚糖凝胶柱层析脱盐 欲去除盐析法分离得到的球蛋白粗提液中大量盐，通常有两种方法： 凝胶层析法、透析本试验采用葡聚糖凝胶——Sephadex G 25层析方法除去球蛋白粗提液中的盐硫酸铵，以便下一步用离子交换层析方法进一步提纯球蛋白。 耍磷断窘鲍穆泵姜沙神竭揖砧已喜刀侄跳晒拧百凉渐扬旅蒋坚症董善绅鸟实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)实验三 血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定(七年制)凝胶层析原理：P31 凝胶层析法是按混合物各组分分子量大小不同随流动相