miR-210-5p对南极独角雪冰鱼心脏发育的作用-上海海洋大学学报.PDF

文章编号：１６７４－５５６６（２０１６）０４－０４８１－０７ ＤＯＩ：１０．１２０２４／ｊｓｏｕ．２０１６０１０１６３０ ｍｉＲ２１０５ｐ对南极独角雪冰鱼心脏发育的作用机制研究 １ １，２ １ １ １ １，３ １，２，３，４ 郭亚南 ，王丛丛 ，刘　云 ，武晓会 ，孙建飞 ，陈　程 ，许强华 （１．上海海洋大学 海洋科学学院，上海　２０１３０６；２．大洋渔业资源可持续开发省部共建教育部重点实验室，上海　 ２０１３０６；３．远洋渔业协同创新中心，上海　２０１３０６；４．国家远洋渔业工程技术研究中心，上海　２０１３０６） 摘　要：ｍｉｃｒｏＲＮＡ为短链非编码ＲＮＡ，通过与靶基因３′ＵＴＲ序列互补在转录后水平发挥作用。已有研究表 明，ｍｉｃｒｏＲＮＡ在心脏发育过程中起着重要的调控作用。南极冰鱼因体内缺乏功能性血红细胞，其心脏出现了 补偿性增生。前期的研究提示，独角雪冰鱼心脏中特异表达的ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ可能与冰鱼心脏的补偿性增生相 关。本研究针对南极冰鱼心脏中高表达的ｍｉＲ２１０５ｐ，运用斑马鱼显微注射、靶基因预测等手段研究了ｍｉＲ ２１０５ｐ对心脏发育的作用机制。结果表明：斑马鱼胚胎注射ｍｉＲ２１０５ｐ后，出现心包膜水肿，心脏发育畸形 等现象。ｑＲＴＰＣＲ分析显示，过表达ｍｉＲ２１０５ｐ的斑马鱼胚胎中，心脏发育相关的标志性基因ｂｍｐ４、ｓｍａｄ１、 ｇａｔａ６以及ｔｂｘ２ｂ的表达水平下调。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析发现，ｂｍｐ／ｓｍａｄ通路中的 ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＳＭＡＤ１、 ＧＡＴＡ６以及ＴＢＸ２Ｂ的蛋白表达水平也显著下调。通过对ｔｂｘ２０基因３′ＵＴＲ的靶基因生物信息学预测，以及 对其进行ＧＦＰ荧光表达分析，发现ｔｂｘ２０基因可能是ｍｉＲ２１０５ｐ的一个靶基因。由此推测，ｍｉＲ２１０５ｐ可能 通过抑制ｔｂｘ２０基因的表达，并调控ｂｍｐ／ｓｍａｄ通路以抑制冰鱼心脏发育。 关键词：ｍｉＲ２１０５ｐ；心脏发育；ｔｂｘ２０；南极冰鱼；ｂｍｐ／ｓｍａｄ通路 中图分类号：Ｑ７１，Ｓ９１７　　　文献标志码：Ａ 　　脊椎动物心脏发育受到许多基因的调控。 发育相关基因的转录后调控时有报道。如：研究 目前研究较多的与心脏发育相关的基因包括 发现 ｍｉＲ１通过钙调蛋白／ＮＦＡＴ信号通路下调 ｂｍｐ／ｓｍａｄ、Ｗｎｔ、ＦＧＦ、Ｎｏｔｃｈ和视黄酸等通路［１－４］。 钙调蛋白信号负调控ｍｅｆ２ａ和ｇａｔａ４，进而抑制心 ［１３］ 多个ｂｍｐｓ家族成员被报道参与了初级阶段的心 肌细胞的增殖 。 肌细胞发育与分化。Ｂｍｐ２可促进心脏祖系细胞 独角雪冰鱼（Ｃｈｉｏｎｏｄｒａｃｏｈａｍａｔｕｓ，ＣＨ，简称 的特异性分化［５－９］；而 ｂｍｐ４在小鼠心脏的房室 冰鱼）是生活在南极深海零度以下无污染水域的 ［１０］ 分隔形成过程中起着很重要的作用 。另外，心 底栖性鱼类。作为已知脊椎动物中唯一不含血 脏的发育还涉及到多个锌指蛋白ＧＡＴＡ家族成 红蛋白的类群，冰鱼的血液循环系统发生了巨大 员的参与。Ｇａｔａ６虽不能诱导ｂｍｐ４的表达，但能 的补偿性生理变化。与同等体重的常见含血红 够维持 ｂｍｐ４的表达水平，并且参与心肌组织内 蛋白的南极鱼类相比，冰鱼心脏约为其他南极鱼 ［１１］ 心脏的三倍以上，血管明显变粗［１４］ 胚层和中胚层的形成 。 。南极冰鱼心 ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）是一类长约 １８～２５ｎｔ 脏是研究心脏增生发育的重要模型，冰鱼心脏的 的单链非编码小ＲＮＡ，主要通过结合于靶基因的 发育与调控机制研究也是备受关注的科学问题。 ３′非翻译区（３′ＵｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄＲｅｇｉｏｎｓ，３′ＵＴＲ），抑 前期研究中，本实