检测大肠杆与菌.pptxVIP

检测饮用水中的大肠杆菌 主要参考：GB5750-12 《生活饮用水标准检测方法-微生物指标》 江 琴 几个概念区分 水样在营养琼脂上有氧环境条件下37℃培养48h后，获得1ml水样所含有菌落的总数 -活菌总数 菌落总数 总大肠杆菌 指一群在37 ℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌 几个概念区分 大肠埃希氏菌 在是大肠杆菌群的情况下鉴别能否产生β-葡萄糖醛酸酶分解荧光底物释放出荧光产物，使菌落在紫外光下产生特征性荧光的细菌 耐热大肠杆菌群 用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠杆菌与粪便中的大肠杆菌群分开，在45.5 ℃仍能生长的大肠杆菌群 总大肠杆菌检测方法(国标法) 多管发酵法 （检验步骤简要说明） 实验准备 乳糖发酵测试：乳糖培养基（24h） 5管法（处理过的自来水），15管（水源水），37℃，24h+-2h，若浓度较大可加倍稀释，该方法样品用量为5*10ml或者55.5ml 包括采样、包括培养基等的相关试剂配制、相关实验仪器的消毒等 分离培养：伊红美蓝培养基（24h） 染色、镜检 复发酵：乳糖培养基（24h） 若产生酸气 取特征菌落 革兰氏染色阴性 计算阳性管数，用最大可能数表示实验结果（查表） 可以看出，检测时间在3days 总大肠杆菌检测方法（国标法） 滤膜法 实验准备 试剂配制、滤膜滤器灭菌 过滤水样 培养：品红亚硫酸培养（24h） 染色、镜检 复发酵：乳糖培养基（24h） 取特征菌落 革兰氏染色阴性 计数阳性菌落数 若产生酸气 37℃，100ml样品，时间2-3days 总大肠杆菌检测方法（国标法） 酶底物法 实验准备 培养基、试剂配制，消毒等前期工作 水样稀释（如需要） 培养 24h 将100ml中加入2.7g+-0.5g的MMO-MUG培养基粉末 10管法或51孔定量盘法培养 培养基：颜色变为黄色为阳性 结果用最大可能数表示（查表） 采用固定底物技术，能产生β-半乳糖苷酶酶分解色原底物释放出色原使培养基颜色变化。样品用量100ml，检测时间1-2days 大肠埃希氏菌的检测方法（国标法） 大肠杆菌埃希氏菌酶底物法：在选择性培养基上能产生β-半乳糖苷酶分解色原底物释放出色原体使培养基呈颜色变化，并能产生β-葡萄糖醛酸酶分解荧光底物释放出荧光产物，使菌落在紫外光下产生特征性荧光的细菌 大肠杆菌埃希氏菌滤膜法：将总大肠杆菌群阳性的滤膜在含有荧光底物的培养基培养，产生β-葡萄糖醛酸酶，分解荧光底物释放出荧光产物，使培养基在紫外光下产生特征性荧光的细菌 大肠杆菌埃希氏菌多管发酵法：多管发酵法总大肠杆菌群阳性，在含有荧光底物的培养基上44.5培养24h，产生β-葡萄糖醛酸酶，分解荧光底物释放出荧光产物，使培养基在紫外光下产生特征性荧光的细菌 大肠埃希氏菌的检测方法（国标法） 三种方法简要步骤 多管发酵法 2、将产生酸气管接种到EC-MUG培养基44.5℃， 24h 3、暗处，366nm紫外，蓝色荧光，为阳性 滤膜法 1、参照总大肠杆菌的滤膜法培养（24h） 2、将有典型菌落生长的滤膜接种到NA -MUG培养36℃,4h 3、暗处，366nm紫外，蓝色荧光，为阳性 酶底物法 1、检测步骤与总大肠杆菌基本相同 2、在最后判断时将黄色再检测，366nm紫外下产生蓝色荧光 1、参照总大肠杆菌的初发酵（24h） 检测大肠杆菌的新(快速)方法 改进的酶底物法 主要是合成新的底物，减少时间 基于分子生物学的方法 DNA探针技术 聚合酶链反应 基于免疫学的方法 酶联免疫法 胶体金免疫法 荧光免疫法 化学发光免疫技术 电化学免疫法 免疫磁珠法