离子交换层与析原理步骤详细.ppt

一、操作注意点： 1、装柱和加样同凝胶层析 2、洗脱液（NaOH和柠檬酸）别混淆 3、控制流速：20滴/min 指出2个洗脱峰分别出现在几号管？ 分别是哪个氨基酸？ 三、结果要求： 离子交换层析ion exchange chromatography 一、原理 离子交换层析是用离子交换剂（具有离子交换性能的物质）作固定相，利用它与流动相中的某种离子进行可逆的交换性质来分离子型混合物的层析方法 低盐 高盐 分离结束 去吸附 带电荷 不同蛋白质在特定pH值下有不同带电特性 胶体 洗脱 与树脂结合力 离子交换树脂如何分离蛋白质 二、离子交换剂的类型 在惰性载体上引入带有电荷的活性基团 （一）按活性功能基团带电荷性质不同 阳离子交换剂 —— 带负电荷，与阳离子交换 阴离子交换剂 ——带正电荷，与阴离子交换 阴离子交换树脂对化学试剂及热都不如阳离子交换树脂稳定。 胶体 胶体 1.离子交换树脂： (1)类型 聚苯乙烯树脂： （二）按载体种类不同 苯乙烯 二乙烯苯 聚苯乙烯 母体 交联剂 聚丙烯酸—阳离子交换树脂 甲基丙烯酸 二乙烯苯 特点：高交换量 pH<8 羧基不完全解离 （2）离子交换树脂的性质 ①、一般离子交换剂的特性 多孔性：疏松、多孔网状，活性基团在网孔内 不溶性：不溶于稀酸、稀碱、有机溶剂 稳定性： 离子交换性：具相当数量的可交换或带电基团 ②、交换量：指交换剂中可交换的离子数 ③ 、交联度： 合成树脂时所用的交联剂在原料总重量中所占的百分比 交联度越大 树脂的网孔越小 膨胀性小 交换量少 交联度越小 树脂的网孔越大 膨胀性大 交换量大 膨胀性增加易引起树脂的机械变形破损 苯乙烯+二乙烯苯 ? 聚苯乙烯 （单体） （交联剂） 二乙烯苯 交联度 = ———————— × 100% 苯乙烯 + 二乙烯苯 目数： 离子交换树脂的颗粒直径大小 Dowex50 为20-50目 Dowex 100 149?m Dowex 50 297?m Dowex 20 840?m 目数越大表示直径越小 阳离子交换树脂 强酸型 磺酸基 -SO3-H+ 中等酸型 磷酸根 -O-PO2H2 亚磷酸根 -O-POH2 弱酸型 羧基 -COOH 阴离子交换树脂 强碱 季胺基团 [-N+(CH3)3] 弱碱 叔胺、仲胺、伯胺基团 （3）可引入的解离基团 （4）离子交换树脂对离子的亲和力 ■ 离子取代顺序： ++ + + + + + + + + + + + + + + + + > > 电荷高者 离子大者 浓度大者 > （4）离子交换树脂对离子的亲和力 ①阳离子树脂 电价数：Na+<Ca++<Al+++<Ti++++ 原子价数相同，原子序数 Li+<Na+<K+<Pb+ ②阴离子 强碱性交换树脂 CH3COO-<F-<OH-<HCOO-<CL-<SCN-<Br-<CrO4=<NO3-<I-<C2O4=<SO4= 弱碱性交换树脂 F-< CL-< Br-= I- =CH3COO<Mo4=<PO4=<NO3-<酒石酸根<柠檬酸根<C2O4=<SO4=<OH 阴离子交换纤维素 —DEAE-纤维素 pH8.6以下分离中性或酸性物质,具二乙胺乙基阳离子交换纤维素 —CM-纤维素 一般pH>4条件下使用,具有羧甲基 2.离子交换纤维素 3.离子交换凝胶—分离大分子物质 如：葡聚糖（Sephadex） 聚丙烯酰胺（PAG） 琼脂糖（Sepharose） 操作过程： 1.装柱 2.离子交换 3.洗脱 ※带电荷量少，亲和力小的先被洗脱下来 ※带电荷量多，亲和力大的后被洗脱下来 三、操作注意点 （一）离子交换剂的选择 原则： 根据被分离物质的性质选择—同一性质离子交换剂中选用对被分离物质各组分之间结合力差异大的型号交换剂 1.被分离物质带何种电荷 2.被分离物质分子的大小 大分子物质选用凝胶，其