使用2D-LC方法去除流动相中质谱不兼容流动相实现蛋白杂质的QTOF.PDF

使用2D-LC 方法去除流动相中质谱不兼容流 动相实现蛋白杂质的QTOF 定性分析 应用简报 作者 摘要 李浪，肖尧，杜伟 目的：利用基于阀切换的2D-LC 技术实现在不改变原始色谱条件的情况下，将某些质谱不 兼容的流动相替换为质谱兼容的流动相，从而实现蛋白类样品中杂质的质谱定性分析。 方法：采用 柱 （ ， ）按照原始分析方法行杂 Agilent orbax 300SB C18 4.6 x 250 mm 5 µm 质分析，并且使用 柱 （ ， ）作为捕集柱对目标 Agilent orbaxSB C18 4.6 x 30 mm 3.5 µm 杂质进行捕集，第二维使用 （ ， ）色谱柱， Agilent orbax 300SB C18 2.1 x 100 mm 1.8 µm 流动相为质谱兼容的 甲酸水溶液 （）和乙腈 （）进行梯度分析。结果：使用上述 0.1% A B 方法可以准确的将蛋白类样品中的杂质峰切换入质谱进行定性分析，并且完全排除了第 一维流动相中质谱不兼容添加剂的干扰。结论：此方法可以在完全不改变原有分析方法 选择性的情况下，实现把质谱不兼容流动相替换为兼容流动相的功能，方法设置简单， 为此类情况的应用提供了良好的解决方案。 酸 （色谱纯， 公司）；甲醇，乙腈 （色谱纯，迪马科技）；超 引言 Sigma 纯水由 纯水机制备 （ ）。蛋白 MiliQ Merck-Millipore 在液相色谱方法的开发中，常会用到一些添加剂以提高色谱行为 表现，尤其是蛋白类样品分析中，常加入三氟乙酸，缓冲盐等添 色谱条 加剂，但是这些添加剂经常无法兼容质谱方法，而在某些分析中， 仪器配置如图 所示，通过阀分别连接两维流路中的分析柱和捕获 1 如杂质分析，经常需要对某些杂质进行质谱鉴定，但是同时又不 柱，样品先由泵 在第一维分析柱上进行分析，当欲检测的杂质流 A 希望改变方法选择性以便通过保留时间对未知物进行定性，但是 出时，通过阀切换流路将杂质品从第一维分析柱洗脱到捕获柱上， 如果将原有方法中不能兼容质谱条件的添加剂改变的 ，很可能 当杂质完全切割到捕获柱上之后阀切换回原位置，样品在分析柱 造成选择性变化，从而无法定位欲分析的未知