真菌基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书.docVIP

◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 真菌基因组DNA快速提取试剂盒 目录号：D目录编号 包装单位 01 50次 02 100次 03 200次 适用范围： 适用于快速提取基因组DNA 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 50次 100次 200次 RNase A(10mg/ml) -20℃ 20 μl 500 μl 1 ml 缓冲液AP1 室温 25 ml 50 ml 100 ml 缓冲液AP2 室温 10 ml 20 ml 40 ml 缓冲液AP3/E 室温 15 ml 25 ml 50 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇 漂洗液WB 室温 15 ml 5ml 50ml第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温 15 ml 20 ml 40 ml 吸附柱AC 室温 50个 100个 200个 收集管（2ml） 室温 50个 100个 200个 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 产品介绍： 该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从中快速简单地提取基因组DNA。可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。 新鲜或干燥的组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点： 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。 注意事项 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13，000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。 缓冲液AP3/E中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 不同来源的真菌组织材料中提取DNA 的量会有差异，一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25μg。 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱 （10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。。 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 提示： 第一次使用前请先在漂洗液WB中加入无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 第一次使用前请先在缓冲液AP3/E中加入指定量无水乙醇! 取适量真菌组织在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。 转移细粉（新鲜组织100 mg 或干重组织20 mg）到一个1.5ml离心管，不要解冻，加入400μl缓冲液AP1 和4μl RNase A( mg/ml)，旋涡振荡充分混匀。 如果组织裂解困难，可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。大多数情况下不需要离心去除未完全裂解的组织，因为后面有一个离心去除的步骤。 65℃水浴10分钟，在水浴过程中颠倒离心管2-3次，混合样品。 加入130 μl 缓冲液AP2，充分混匀，冰上放置5分钟， 1,000 rpm 离心5-10 分钟，小心吸取上清到一个新的1.5ml