13_第13章_免疫细胞分离与免疫细胞功能检测及应用.ppt

第十三章 免疫细胞分离与免疫细胞功能检测及应用;;;;第一节 免疫细胞的分离 ;分离免疫细胞的样本来源;分离免疫细胞的目的;细胞分离基本原理;一、外周血单个核细胞分离 ;不同细胞密度不同;不同细胞密度不同;聚蔗糖（Ficoll）－泛影葡胺分层液法;2. 试剂：Ficoll－Hypaque;3. 离心分离：将细胞叠加在密度合适的分层液(1.075-1.09) 上层，经离心后细胞可分为不同的区带。;4. 收集细胞 5. 洗涤、计数;密度梯度离心(Ficoll)离心　;（二）方法评价;二 、淋巴细胞分离;贴壁粘附法;吸附柱过滤法;Percoll分层液法;将PBMC加在分离液上低速离心后可分离PBMC中的单核细胞和淋巴细胞;三 T、B细胞和T细胞亚群的分离 ;磁性微球分离法 ;磁珠大小可以选择;　;;免疫磁珠法细胞分选过程;免 疫 磁 珠 细 胞 分 选 装 置;全自动细胞分选系统;荧光激活细胞分离仪分离法 ;流式细胞分析仪;第二节 淋巴细胞表面标志的检测及亚群分类;细胞表面分化抗原（CD抗原）;一、T细胞表面标志及其亚群 ;辅助性T细胞;细胞毒性T细胞TC1:CD3+CD8+CD30-TC2:CD3+CD8+CD30+;二、B细胞表面标志 ;;三、NK细胞表面标志 ;T细胞及NK细胞;第三节 其他的免疫细胞;第四节 淋巴细胞的功能检测;淋巴细胞;一、T细胞功能的检测;（一）T淋巴细胞增殖试验;;2. 淋巴细胞转化的刺激物;;（1）形态学检查法;方法学评价：;（2）3H-TdR掺入法;(二) T细胞分泌功能测定;（三）T细胞介导的细胞毒试验;形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞 计数残留肿瘤细胞 同位素法 ：淋巴细胞（CTL）+含51Cr 的肿瘤细胞 肿瘤细胞破坏 51Cr 释放 测定γ射线;;(四) 体内试验;二、B细胞功能检测;(一)B细胞增殖能力的试验;(二) 溶血空斑试验;2. 方法学：;3．临床应用与评价;(三)　 B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法;2．应用与方法学评价：;(四)　体内试验;染色计数;第六节 免疫细胞表面标志和 功能检测的临床应用;淋巴细胞功能检测的临床意义 ;思考题;小 结;;;免疫细胞功能试验包括体内和体外试验。免疫细胞功能体外试验主要根据免疫细胞的增殖活性、分泌活性和杀伤活性等特性而进行实验设计。 具体免疫细胞功能检测内容包括：①淋巴??胞功能检测，包括T细胞增殖试验、T细胞分泌功能测定、T细胞介导的细胞毒试验以及体内试验；B细胞增殖试验、溶血空斑试验、酶联免疫斑点法以及体内试验；NK细胞活性检测方法：酶释放法、放射性核素释放法、化学发光法、流式细胞术法等。②吞噬细胞功能检测，方法有趋化功能检测、吞噬和杀菌功能测定等。