实验 一的、RNA提取及检测.pptVIP

实验 一、RNA提取及检测 一、实验目的 掌握植物RNA RNA提取及检测方法 二、实验试剂及材料 水稻叶片、液氮、Trizol试剂、氯仿、异丙醇、DEPC水 三、实验器材 恒温水浴锅、PCR仪、台式低温离心机、移液枪、研钵、紫外分光光度计，一次性手套。 四、实验步骤 采用Trizol法提取RNA(50－100mg组织∕ml trizol)，以加1ml Trizol为例，操作流程如下： (1) 研钵加液氮数次至足够冷，加入样品，研磨至粉末。加入Trizol（每100mg组织加1ml的Trizol），充分研磨，放在室温下解冻。 (2) 除不溶性物质：2～8oC下12000g离心10min，不溶性物质沉淀，将RNA的上清移入1.5 ml离心管中。 (3)相分离：在15～30℃下放置5min，使核蛋白复合物完全解离。加0.2ml氯仿，剧烈振荡15 sec，室温下温浴2～3min。2～8℃下，≤12000g离心15min，RNA全部溶解于上层水相中，把水相移入另一1.5ml离心管中。 (4) 氯仿再次去杂：加0.5ml氯仿，剧烈振荡15sec，室温下温浴2～3min；2～8℃下，≤12000g离心15min，把水相转入1.5ml离心管中。 (5) RNA沉积：加入0.5ml异丙醇，15～30℃温浴10min；2-8℃下，≤12000g离心10min，RNA沉积在离心管的底部及