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- 2017-10-19 发布于湖北
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1.2 基因工程的基本操作程序目标导航 1.结合教材图1-6,整体把握并说出基因工程的基本操作程序。2.理解获取目的基因的途径及基因表达载体的构建。3.理解目的基因导入受体细胞的方法、检测与鉴定目的基因的方法。一、目的基因的获取(阅读P8-11)1.基因工程的基本操作程序(1)目的基因的获取。(2)基因表达载体的构建。(3)将目的基因导入受体细胞。(4)目的基因的检测与鉴定。2.目的基因的获取(1)目的基因主要是指编码蛋白质的基因,也可以是一些具有调控作用的因子。(2)常见方法①从基因文库中获取基因文库的种类②利用PCR技术扩增目的基因a.原理:DNA双链复制。b.条件:引物、DNA模板、Taq酶、四种脱氧核苷酸。c.过程:目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在DNA聚合酶作用下进行延伸,如此重复循环多次。d.结果:每一次循环后,目的基因的量可以增加一倍,即成指数形式扩增(约为2n,n为扩增循环的次数)。③人工合成法:如果基因比较小,核苷酸序列又已知,可借助DNA合成仪用化学方法直接人工合成。二、基因表达载体的构建(阅读P11)1.基因表达载体的功能使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。2.基因表达载体的构成3.基因表达载体的构建过程一般用同一种限制酶分别切割载体和目的基因,再用DNA连接酶把两者连接。三
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