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细菌室工作流程简介一、标本接种与涂片染色（一）标本的接种：⑴培养基选择及接种方式：标本类型 ? ? ? ? ? ?培养基组合 ? ? ? ? ? ? ? ?接种方式痰、咽拭子 ? ?血平皿+中国蓝平皿+流感嗜血杆菌平皿 ? ? 三区划线法尿 ? ? ? ? ? ?血平皿+中国蓝平皿 ? ? ? ? ?血：直、曲线法，中：三区划线法分泌物 ? ? ? ?血平皿+中国蓝平皿 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?三区划线法大便 ? ? ? ? ?SS平皿+TCBS平皿 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?三区划线法输液液体、腹水、 ? ? ?普通肉汤管 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?直接倾倒胆汁、胃液、脓液等血、脑脊液、骨髓、 ? ? ?血培养瓶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?用注射器注入胸水、关节液培养类别 ? ? ? ? ? ? 选择性培养基 ? ? ? ? ? ? ? ? ?接种方式真菌 ? ? ? ? ? ? ? ? 沙氏培养基 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?直接划线淋球菌 ? ? ? ? ? ? ? 巧克力淋球菌培养基 ? ? ? ? ? ?直接划线结核杆菌 ? ? ? ? ? ? 罗氏结核菌培养管 ? ? ? ? ? ? ?直接划线L—型细菌 ? ? ? ? ? 高渗肉汤培养管 ? ? ? ? ? ? ? ? 直接接种霍乱弧菌 ? ? ? ? ? ?碱性蛋白胨培养管 ? ? ? ? ? ? ? 直接接种⑵血培养瓶选择如下：培养瓶瓶的颜色抽血量（ml）标准需氧培养瓶蓝色5—10标准厌氧培养瓶紫红色5—10中和抗生素需氧培养瓶绿色5—10中和抗生素厌氧培养瓶橙黄色5—10小儿血培养瓶浅黄色1—2结核杆菌血培养瓶黑色5—10（二）标本涂片和染色1、看湿片（未染色片）：⑴正常人体的下呼吸道是无菌的，上呼吸道有正常菌群栖居。下呼吸道标本来源有多种：痰、支气管肺灌洗吸出液、气管抽出液或刷子、肺穿刺或活组织等。痰标本在接种前需涂片镜检，以确认留取的标本是否有临床意义。在低倍镜下计数每低倍视野白细胞和上皮细胞的平均数目，按照以下标准判定标本是否适合做培养：白细胞 ? ? ? ? 上皮细胞 ? ? ? ? 是否适合A： ? ? ? ＞25 ? ? ? ? ? ? ＜10 ? ? ? ? ? ? ?是B： ? ? ? ＞25 ? ? ? ? ? ? ＜25 ? ? ? ? ? ? ?是C： ? ? ? ＜10 ? ? ? ? ? ? ＞25 ? ? ? ? ? ? ?否不合格的标本应电话告诉临床科室重留标本。⑶霍乱弧菌（投标样动力，运动似流星）2、革兰氏染色：⑴涂片革兰氏染色找细菌：革兰氏阳性菌：球菌（G+C）、杆菌少（G+b）革兰氏阴性菌：杆菌（G-b）、球菌少（G-C）⑵涂片革兰氏染色找真菌：找菌丝、孢子⑶菌群分析：大便标本球、杆菌比例。备注：加德纳尔氏菌是细菌性阴道症的主要致病菌之一，此症有如下特点：1)阴道排出物过多；2)阴道PH＞4.5；3)阴道上皮细胞被G-小b覆盖形成为线索或线球细胞；4)KOH试验阳性：阴道分泌物滴加10%KOH后，立即出现鱼腥味和氨味；3、抗酸染色：查找抗酸杆菌。如结核杆菌、麻风杆菌。4、墨汁染色：查找新型隐球菌。特点：有荚膜，夹膜折光性强。5、看菌落形态：1.肉眼看：? 血平皿上：有脐窝状的可能是草绿色链球菌，微黄色可能是奈瑟氏菌，干燥的可能是真菌，乳白色的可能是葡萄球菌，湿润的可能是肠球菌。? 中国蓝上：微黄色可能是奈瑟氏菌，有选择性地促进革兰氏阴性菌生长，发酵型革兰氏阴性杆菌因分解乳糖能力不同，在此平皿上的菌落颜色不同。?流感嗜血杆菌平皿上：微黄色可能是奈瑟氏菌，（三）转种：1.阳性血培养瓶：1）涂片革兰氏染色：找到细菌→向临床科室报告；未找到细菌→暂不报告，待转种生长后再报；2）转种：血平皿、中国蓝平皿。2.肉汤管：1）培养3天后仍然透明清亮：转种血平皿一个；2）浑浊：转种血平皿、中国蓝平皿各一个。二、细菌鉴定（视标本、科室而定）（一）标本培养的菌落计数及有意义菌落的筛选1、痰：（1）菌落计数1）只有第一区生长，计103/ml；2）第一、二区生长，第三区不长，计105/ml；3）三个区均生长，计107/ml；（2）菌落筛选1）＜103/ml ：视科别而定，除ICU、CCU、急诊科、老年科和呼吸科危重病号外，一般报告为：无致病菌生长；2）＝103/ml ：除非细菌生长较纯或可能为葡萄球菌需进一步处理外一般报告为：无致病菌生长；3）＞103/ml ：①根据菌落形态将其中意义不大的标本报告单发出，一般报告为：无致病菌生长