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微生物实验报告 霉菌的培养及观察实验 刘欣怡201100140057 生物科学基地班 组别：周一下午三组 同组者：曹平平，周楠， 刘艺，刘希伟 实验完成时间：2012年11月12号 一、实验原理 1. 观察霉菌的菌落特征，学会霉菌的一般制作方法。 2. 观察并理解多种霉菌的个体形态及生长繁殖方式。 3. 进一步巩固无菌操作以及显微镜的使用 二、实验器材 1. 菌种： 黑曲霉，毛霉，青霉，根霉的培养 7d 的马铃薯琼脂平板培养物（小室培养）。 2. 仪器： 无菌操作台，分析天平，玻璃棒，三角瓶，小烧杯，加热炉，漏斗，纱布，培养皿，载玻片，盖玻片，U 型玻璃棒，解剖刀，镊子，接种环，移液管，酒精灯，火柴，显微镜等。 3. 试剂及培养基： 马铃薯培养基（其配方见附录），蔗糖，琼脂，去??子水100，现配的20%甘油，酒精溶液等。 三、实验原理及方法 1、霉菌 霉菌的营养体是分枝的丝状体。其个体比细菌和放线菌大得多，分为基内菌丝和气生菌丝。气生菌丝生长到一定阶段又可分化出繁殖菌丝。不同霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。 霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约为3-10μm）,常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，且孢子容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液，用此染液做霉菌制片的特点是细胞不变形，具有杀菌、防腐作用，不易干燥，能保持较长时间，能防止孢子四处飞散，棉兰具有一定的染色作用，染液的蓝色能增大反差。（如果用水封片，常因渗透作用而膨胀，水也易使菌丝、孢子和气泡混为一团，影响观察。） 霉菌菌落特征： A。因霉菌的菌丝较粗且长，故形成的菌落较疏松，常成绒毛状、絮状、蜘蛛网状或毡毯状，一般比细菌和放线菌菌落大几倍到几十倍。 B。在固体培养基上菌落最初往往是浅色或白色，当菌落上长出各种颜色的孢子后，由于孢子具有不同形状、构造和颜色，使菌落表面呈现肉眼可见的不同结构和色泽，如黄、绿、青、黑、橙等。 C。有些霉菌的菌丝还能分泌一些水溶性色素扩散到培养基内，使培养基正面和反面呈现不同的颜色。 D。同一霉菌在不同成分的培养基上可形成不同特征的菌落，但各种霉菌在固定的培养基上形成的菌落，其形状、大小、颜色等特征是稳定的，因此菌落特征是鉴定霉菌的重要依据之一。 2、观察方法 观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法，本次实验采用载玻片培养观察法（小室培养法）。 3、载玻片培养观察法（小室培养法） 用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。 4、有隔菌丝和无隔菌丝： 5、关于本实验所用霉菌的初步认识及比较： 四、实验内容 根据本实验提供的四种霉菌，即根霉、毛霉、黑曲霉和青霉，运用小室培养的方法在28℃下正置培养这四种霉菌，一个培养皿中有两个琼脂小块，分别接种两种??菌，一周后用显微镜观察这四种霉菌各自的形态特征，记录观察的结果并比较不同霉菌间形态特征上的区别 五、实验步骤 1、配制马铃薯培养基 配制100ml马铃薯培养基（PDA），其成分配比及配制方法见附录。将土豆去皮后切成小块，称取所需量的土豆块后将其放入盛有去离子水的小烧杯中，加热煮沸20分钟，期间可用玻璃棒进行搅拌。加热结束后，添加去离子水使烧杯中溶液为100ml。先用一层纱布（放置在另一个干净烧杯口）进行过滤，然后在用6层纱布过滤上一步中的滤液。最后，向其中加入称量好的糖和琼脂，把液体转移到锥形瓶中，加棉塞并用牛皮纸封口，然后放入灭菌锅中进行灭菌。 2、需要灭菌的其他器材 取6个干净的平皿，其中4套平皿中各放入一张滤纸片、一个U型玻璃棒，一个载玻片和4个盖玻片。将这6套平皿包在一起；选取两个2ml的滴管，分别用牛皮纸包好。 3、制作琼脂块 灭菌后，在酒精灯旁无菌操作倒培养基少量于灭菌培养皿（其底部已经画好了格子）中，静置冷却凝固成薄层。将已在酒精中浸泡一段时间的解剖刀取出，在酒精灯上进行灼烧。解剖刀稍稍冷却后，解剖刀沿着平皿底部已经划好的线切割该培养基，得到为若干1cm2左右的琼脂块。 4、无菌操作台的准备