中国明对虾t7噬菌体展示文库的构建与免疫相关基因的淘选-海洋学报.pdfVIP

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2017-11-03 发布于天津
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中国明对虾t7噬菌体展示文库的构建与免疫相关基因的淘选-海洋学报.pdf

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29 5 V ol 29, No5 2007 9 A CT A OCEA N O L O GICA SIN ICA September 2007 T7 1, 2 1 1 1* 刘宁 , 杜欣军, 赵小凡 , 王金星 ( 1 , 250 100; 2 , 250014) 利用淘选噬菌体展示文库的方法, 获取中国明对 ( Fennerop enaeus chinensis) 的免疫相关基因. 首先用中国明对的血细胞mR N A 构建了其T 7 噬菌体展示文库, 文库滴度达到 11 1011 pf u/ cm3 , 然后用不同的配体( 脂多糖/ 几丁质/ 不同的细菌) 进行文库淘选. 淘选3 轮后随机挑取数个噬菌斑, 用T 7 select 10- 3b 载体引物扩增插入片段, 将不同长度的片段克隆入p MD 18- T 载体后进行测序. 把基因序列在G en Bank 数据库进行BL A ST 搜索比对, 同时在Ex PA Sy 进行编码蛋白质的结构和性质的预测. 经不同配体淘选, 获得了16 个基因片段, 其中围食膜蛋白蛋白质精氨酸N 端转甲基酶血小板反应素R N A 结合蛋白核自身免疫精蛋白等基因, 首次在中国明对中发现. T 7 噬菌体展示; 先天免疫; 病原相关分子模式; 中国明对 S94 54+ 6 A 0253- 4193( 2007) 05- 0 102- 07 - . 1 ( Fennerop enaeus chinensis) T 7 20 90 , , ( LP S( chitin) , ) . , , ( Pat tern reco gnition re- , cept ors , PR Rs) , , . , . . 2 ( PRPs) ( P RM s) , 21 ( P at hog en associat ed molecular p at- mR N A ( Qu ickPrep micro mR- t ern s , PA MP s) , ( L ipopolysacch aride, N A Prif ication) A mersh am Biosciences LP S) ( P ept idog lycan , P GN ) , T 7 Select system N ov ag en ( L ipot eichoic acid, L T A ) ( M annan s) , DN A [ 1, 2] , . , T 4 DN A MM L V T 4 pM D 18- T T aK a- 2006-03-08; 2007- 0 1- 29 ( ; ( 20060422034) . ( 1975- ) , , , E- mail liu- n ing26@ 163. com * , jx wang @ sdueducn 5 T 7 10 3