DNA和蛋白质的提取.ppt

讨论2：如何证明他们是遗传物质？ 讨论3：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？ 讨论1：构成生物体的遗传物质是什么？ 1、提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 2、生物大分子 主要指蛋白质、酶和核酸 3、提取DNA的基本思路 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分 提取DNA的方法 4、DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反 ①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出 6、DNA在酒精溶液中的溶解性 DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离 7、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性 ③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响 （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 2、植物细胞 ①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜 ②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ （三）去除滤液中的杂质 为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理 讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质 为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质 （四） DNA的析出与鉴定 1、以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠，防止血液凝固。 2、加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 3、二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。