DNA重组工具简化.ppt

人教版选修3现代生物科技专题 问题探讨： 　　　苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 　　　让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 　 小结 随堂练习 1、关于限制酶的说法中，正确的是（ ） A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列 B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中 　 　 什么叫平末端？ 三 模拟操作：重组DNA分子的模拟操作 注意：这两条DNA分子的碱基对不是随意乱写的。 首先，每个DNA分子上的两条链上的碱基要互补配对； 第二，每个DNA分子中每条链都存在一个G-A-A-T-T-C的碱基序列，也就是说是EcoRI限制酶的识别序列，并存在G-A的切割位点。 C C C G G G G G G C C C 中轴线 SmaI限制酶的切割： C C C G G G G G G C C C 平末端 平末端 只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 Sma Ⅰ 平末端　　　平末端 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 BACK * 苏云金芽孢杆菌 毒蛋白 普通棉花　　抗虫棉 1.1 DNA重组技术的基本工具 想一想：需要做哪些关键工作？ 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 1.1 DNA重组技术的基本工具 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 从苏云金杆菌细胞内提取出抗虫基因 关键步骤二： 抗虫基因与运载体DNA拼接 关键步骤三： 抗虫基因导入受体(棉花)细胞 1.1 DNA重组技术的基本工具 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与载体DNA“缝合” 关键步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”—— 基因进入受体细胞的载体 1.1 DNA重组技术的基本工具 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” ①来源： 主要从原核生物中分离纯化出来。 ②种类： 已从近300种微生物中分离出约4000种限制酶。 ③作用： 1.能识别双链DNA的某种特定核苷酸序列 2.使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 具有特异性。 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子， ④作用特点： 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成 少数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成 ⑤限制酶的识别序列： 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” ⑥形成两种末端 粘性末端 平末端 EcoRI限制酶的切割： SmaI限制酶的切割 2..16 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 思考? 相同点 区别2 区别1 DNA连接酶 DNA聚合酶 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链 2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板 二、DNA连接酶——“分子缝合针” 二、DNA连接酶—“分子缝合针” 1、作用： 形成磷酸二酯键 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 2、类型： 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 二、DNA连接酶—“分子缝合针” 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 T4DNA连接酶 三、基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车” 1、假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 导入