液相色谱质谱联用仪新型高通量前端系统.PDF

新闻 液相色谱质谱联用仪新型高通量前端系统 质谱 （MS ）技术应用于药物发现已有数十年。从以往来看，仪器产生的数据大大超过软 件处理的能力。近年来，软件的速度和分析能力大大提高，促使仪器制造商转向提高系统的效 率和通量。这大大提高了质谱前面分离技术的革新，比如从液相色谱发展到高压液相色谱以及 超高压液相色谱。 最进前端技术的发展侧重于提高质谱的效率，一般是提高进样速度和质谱分析速度。如最 近开发的多维液相色谱技术 （LC ）和激光二极管热解析技术 （LDTD ），二者都是通过增加质 谱仪有效检测数据的时间，并最大限度减少其空闲时间，从而达到提高效率的目的。 为实验室选择最佳的高通量技术需要认真考虑对通量的要求以及技术的特点。当评估多维 液相色谱和激光二极管热解析时，科学家至少应考虑三个主要问题：速度，灵敏度和系统易优 化性。本文介绍了两种技术的基本原则，并比较他们在两个共同的药物发现应用中的性能。 前端可替代技术 多维液相色谱 多维液相色谱系统是使用多于一个的高效液相色谱将样品注射到单一的质谱仪，使其提高 通量。每个通道可以独立操作，用户在所有四个通道可以同时运行相同的方法，或者每个通道 都有不同的方法。双通道系统的通量是单液相色谱通量的一倍，而一个四通道系统的通量是其 四倍，将质谱的空闲时间从百分之七十五减至百分之四。多维液相色谱系统最大程度地利用质 谱仪，使质谱几乎没有空闲时间。 多维液相色谱技术有很多优点。最重要的是没有通过牺牲色谱分离而提高了样品的通量。 因为每一路的液相色谱的操作是分开和平行的，在整个洗脱步骤中，质谱是对单个样品进行分 析，在整个过程中保持数据质量和灵敏度。软件可以控制泵的操作，阀切换，清洗和梯度程 序。 此外，每组样品的分析都是在单一液相色谱系统中运行。标准样品，质控样品和待研究样品 的分析都是在同一个硬件上完成。与一台通过阀切换的液相色谱质谱没本质区别。只要实验设 计合理，多维液相色谱系统的日内和日间精密度和准确度都可以满足LC-MS/MS 的公认标准。 激光二极管热解析 激光二极管热解析与液相色谱是根本不同的，因为它不需要液相。激光二极管热解析是将 2-10µL 的样品注入到96 孔板中。每一个孔底部植入一块金属。将该盘室温干燥。用激光二极 管加热孔，使干燥的样品迅速产生热解析。完整的热解析分子被载气带入到大气压化学电离区 域进行离子化。大气压化学电离不需要溶剂或流动相就可以完成，这改变了离子化的特征，可 以分析那些在普通大气压化学电离不能有效离子化的化合物。 热解吸能产生完整的解吸附分子，温度低于熔点。激光二极管热解析的性能源于高的加热 速率，载气流量以及高灵敏度 激光二极管热解析消除了样品交叉污染的风险，不需使用色谱技术如高效液相色谱。此 外，它还没有由流动相引起的背景噪音，或基质效应（如MALDI ），而且样品制备也非常简 单，每孔只需要2-10µL 样品然后进行快速溶剂蒸发。而且不需要在样品中添加任何的基质。 比较 选择一个高通量的前端系统很大程度上取决于三个重要变量：速度，灵敏度，易优化特 点。因为激光二极管热解析不需要物理化学分离，所以它比多维液相要快但不灵敏。激光二极 管热解析处理一个样品需要7-8 秒。而多维液相色谱系统需要25 秒。对于许多用户，这个微不 足道的差异可以忽略不计，在1 分钟以内都是可以接受的。 虽然激光二极管热解析方法提供更快的速度，但是没有物理分离有一个缺点：低灵敏度。 例如睾丸酮 4-羟基代谢产物和 6-羟基代谢产物有同样的分子量。当用液相色谱时它们只是物理 分离，两个峰有不同的保留时间，使得他们可以清晰的区分开并且实现定量。用激光二极管热 解析进行同样的实验时，4-羟基代谢产物和 6-羟基代谢产物同时洗脱下来（同时解吸附），不 可能对每个代谢物实现单独定量。 系统易优化的特性是多维液相色谱和激光二极管热解析又一个不同。系统优化实际上是为 了确定理想参数的一个过程。例如对于一个质谱实验来说，有必要优化S 透镜电压，碰撞能 量，和前体离子和产物离子的分子量。 当前端采用多维液相色谱，可用注入模式优化质谱的参数。将化合物以一定速率和浓度泵 入质谱中，软件会自动改变质谱参数，监控结果，自动找到最优的设置。 当前端采用激光二极管热解析，可采用环注射优化获得最佳质谱参