基于ks的锌指核酸酶真核细胞筛选体系的构建与验证-畜牧兽医学报.pdfVIP

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2017-11-11 发布于天津
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基于ks的锌指核酸酶真核细胞筛选体系的构建与验证-畜牧兽医学报.pdf

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畜牧兽医学报基于的锌指核酸酶真核细胞筛选体系的构建与验证李静心王慧利孟春花张庆晓蒋进王婧曹少先江苏省农业科学院畜牧研究所南京南京农业大学动物科技学院南京江苏省农业科学院动物品种改良和繁育重点实验室南京摘要旨在构建基于报告基因的真核细胞筛选体系为的筛选提供一种直观准确灵敏的方法以为基础去除基因的起始密码子后在多克隆位点上游插入构建筛选体系的通用载体将的靶序列插入到通用载体基因上游且使起始密码子和基因处于不同中构建筛选载体将转入细胞中筛选细胞系转染到内通过观察荧光判断是否有效挑取荧光细胞进行测序验证靶序列的敲除测序分析表明通用载体和含靶序列的筛选载体序列完全正确转入细胞中观察不到绿色荧光说明靶序列插入后使发生移框转染靶序列对应的到中观察到荧光的表达说明有效挑取个荧光细胞单克隆测序表明个克隆靶序列发生缺失突变锌指核酸酶真核细胞筛选体系构建成功相对于其他方法本筛选体系更加准确直观灵敏更适用于动植物等真核细胞的筛选同时还可应用于和的筛选关键词锌指核酸酶筛选通用载体绿色荧光蛋白真核细胞中图分类号文献标志码文章编号