表皮黑素细胞的纯化.pdfVIP

天津医药2017年 1月第45卷第 1期 细胞与分子生物学 表皮黑素细胞的纯化 李娣，张汝芝 摘要：目的 比较不同包被材料、不同培养条件对黑素细胞的纯化作用。方法 将包皮组织、包皮的表皮组织 及消化所得的细胞悬液，分别培养于层黏连蛋白或基质胶包被的培养板中，传代时进行差别胰酶处理、80％一90％融 合时加入 G418(O．05％)4min或5-BrdU，通过黑素细胞的标记性抗体 HMB一45荧光染色，观察黑素细胞纯度。结 果 原代培养中，细胞悬液比组织块获得细胞更多更快，单纯表皮比带真皮的组织块更早有细胞迁移并增殖 ；层黏 连蛋白包被比基质胶包被更有利于黑素细胞生长；差别胰酶处理以及加人一定浓度的G418或5-BrdU均可纯化黑 素细胞 ，但G418、5-BrdU浓度较大时对细胞损伤明显。结论 采用层黏连蛋白包被板培养包皮来源的细胞悬液，传 代时采用差别胰酶处理，传代后加小剂量的G418，有利于黑素细胞纯化，而不影响其生长。 关键词 ：黑素细胞；细胞培养技术；纯化 ；包被材料 中图分类号 ：R751 文献标志码：A DoI：10．11958／20l612l2 PurificationofepidermaImeIan0CVteSinculture LIDi．ZHANG Ru-zhi TheThirdAffiliatedHospitalofSooehowUniversity,Suzhou213003,China CorrespondingAuthor E—mail：zhangruzhi628@163．corn Abstract：0bjective Tocomparetheinfluenceofdifferentcoatingmaterialsandculturalconditionsonthe purificationandgrowthofhumanepidermalmelanocytes．Methods Thefull—thickforeskin，epidermisandcellsuspension obtainedfrom humanforeskinwereculturedintheplates，whichwereprecoatedwithmatrigelorlamininrespectively．When havingreached80％一90％ confl uence．thecellsweretreatedwithO．05％ trypsin—EDTA for4minutesandresuspendedin M254medium，whichweresupplementedwithG418and5-BrdU，respectively．Thepurityofmelanocyteswasobservedby an immunofluorescence staining with melanocyte markers．Results During the primary cuhure，the cellsuspension generatedmorecellsatfasterspeedcomparedwiththoseof skinexplantsandepidermalspecimen．Moreover，theepidermis releasedcellsearlierandproliferatedquicklyoverskinexplants．Themelanocytesintheplatescoatedwithlamininother thanwjtl1matrigeldisplayedfasterandbettergrowth．Theunwantedkeratinoeytesandfibroblastswereremovedbyusing differentiationtryps