miR-506-3p 对PIK3CA 基因的靶向调控作用.PDFVIP

宁夏医科大学学报 第 39 卷 5 期 · · JournalofNingxiaMedicalUniversity 2017 年 5 月 492 文章编号 ：1674-6309（20 17 ）05-0492-05 ·论著 · miR-506-3p 对 PIK3CA 基因的靶向调控作用 李振昊 1 ， 徐广贤 1，2 ， 高 倩 1 ， 蒋 丹 1 ， 徐 向荣 1 ， 屈昱 良 1 （1.宁夏医科大学临床医学院，银川 750004 ； 2.宁夏医科大学总医院，银川 750004 ） 摘要 ：目的 研究 miR-506-3p 对 PI3K-Akt 信号通路 中关键基 因 PIK3CA 的靶 向调控机制 。 方法 化学合成 miR-506-3p 过表达模拟物 mimic 及 miR-506-3p 抑制剂 inhibitor ； 构建含有 PIK3CA 基 因 3 ’-UTR 野生型及 突变体到荧光素酶报告载体 中； 将测序结果正确 的 pMIR-Report-PIK3CA -Wt 和 pMIR-Report-PIK3CA -Mut 重组质粒 ，与 miR -506 -3p 的 mimic/ inhibitor 及 pRL -TK 共 转染 至 HEK -293T 细胞 ，利 用 双荧 光 素酶 报告 系统 和 Western blot 验证 miR-506-3p 与 PIK3CA 的靶 向关系 。 结果 测序结果显示 pMIR-Report-PIK3CA - Wt 和 pMIR-Report-PIK3CA-Mut 两个重组质粒构建成功 ，Western blot 结果显示转染 miR-506-3p mimic 的 293T 细胞 中 PIK3CA 蛋 白表达下调（P0.05 ）；而转染 miR-506-3p inhibitors 的 PIK3CA 蛋 白表达上调（P0.05 ）。 结论 miR-506-3p 可作用于 PI3K-AKt 信号通路 ，通过靶 向 PIK3CA 发挥其负性调控作用 。 关键词 ：miR-506-3p ；PI3K-Akt 信号通路 ；PIK3CA 基 因 中图分类号 ：R734.2 文献标识码 ：A DOI ：10.16050/j .cnki.issn1674-6309.20 17.05.002 MicroRNAs （miRNAs ）是 长 度 为 20 ~24nt 非 盒 （天根生物有 限公 司 ）； 荧光素酶报告检测系 编码小分子 RNA ， 它通过与其靶基 因 mRNA 分 统 ，感受态细胞 E.coli.DH5α （北京全世金生物技 子 的 3 ’UTR （3 ’-untranslated -region ，3 ’UTR ）结 术 有 限公 司 ）；mimic -N.C 、miR -506 -3p mimic 、 合 ，导致靶基 因 mRNA 降解或者 翻译受 阻[1] 。 大 inhibitor-N.C ，miR-506-3p inhibitor （上海吉马制 约有 1000 多种 miRNA 参 与到蛋 白编码 的过程 药技术有 限公 司 ）； 脂质体LipofectamineR 2000 、 中[2] ，从而参与到细胞生长发育 ，免疫调节 ，肿瘤 血清和 DMEM 高糖培养基 ，ECL 化学发光液 （美 的发生与发展等生物学过程 中。 国 Thermo Fisher Scientific 科 技 公 司 ）； PCR 引 MiR -506 -3p 是 与 X 染 色 体 相 关 的 miR - 物合成及测序 （上海生工生物工程股份有 限公 506-514 簇 中一个成员 ， 位于 X