脂溶性维生素的测定PPT.ppt

脂溶性维生素的测定及发展趋势 脂溶性维生素的测定 脂溶性维生素的定义： 它是指某些能溶于脂肪和大部分有机溶剂，而不能溶于水的维生素。 脂溶性维生素的种类： 维生素A、维生素D、维生素K、维生素E 检测的一般程序： 3.使用仪器： 维生素D的检测方法： 脂溶性维生素共同特点 脂溶性维生素的功能： 脂溶性维生素测定未来发展趋势： 脂溶性维生素的发展： Thank You! * * 食安1104 王润东 曾海欢 朱志辉 陈喜霖 1. 维生素Ａ、维生素Ｄ的测定方法和原理 2. 维生素E、维生素K的检测方法 3. 维生素的生理功能 4. 维生素测定未来的发展趋势 三氯化锑比色法 紫外分光光度法 荧光分析法 高效液相色谱法 分离富集 常用检测方法： 样品处理 排除干扰物质 检测 1．维生素A测定原理 : ?维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑作用生成蓝色物质，其颜色深浅与溶液中的维生素含量成正比。该蓝色物质虽不稳定，但在一定时间内可用分光光度计于620nm波长处测定。 VitA + SbCl3 → 蓝色物质 λmax 618nm～620nm 2．适用范围 对于维生素A含量不高的使用皂化法处理样品， 对于维生素A高的样品使用研磨法处理样品 721-紫外分光光度计 4.样品处理 样品处理：根据样品性质，分为皂化法、研磨法。 （1）皂化法（适用于每克样品中Va<5ug时） 皂化→提取→洗涤→浓缩 ① 皂化：称取0.5~5g样品于锥形瓶中 → 加入20~40ml无水乙醇以及10ml 50%KOH溶液 → 至于电热板回流30min至皂化完全为止 ② 提取：皂化瓶内混合物移至分液漏斗 → 用50ml无水乙醚分次 洗涤皂化瓶，并合并洗涤液 → 重复无水乙醚抽提过程至无Va为止 ③洗涤：合并醚层后 → 先用水洗提取液，弃去水层 → 再用5~20ml 0.5mol/L KOH溶液洗涤 → 轻轻振后弃去下层碱液（除去醚溶性酸皂） → 最后用水洗涤醚层，至洗涤水不成碱性（酚酞为指示剂） ④浓缩：将醚层经过无水硫酸钠滤入锥形瓶 → 锥形瓶于水浴蒸馏至剩下5ml乙醚 → 减压抽气至干 → 立即加入三氯甲烷溶液使Va含量在适宜范围内 4.样品处理 （2）研磨法（每克样品Va含量>5~10ug） 研磨 → 提取 → 浓缩 ①研磨：精确称2~5g样品 → 放入盛有3~5倍质量的无水?Na2SO4研钵中 → 研磨至样品中水分被完全吸收，并均匀质化 ②提取：小心地把均匀质化样品移入锥形瓶内 → 准确加入50~100ml乙醚 → 振摇抽提2min，使Va溶于乙醚中 → 使其自行澄清（大约1~2h），或离心澄清（乙醚易挥发，温度高时应在冷水浴中操作） ③浓缩：取澄清提取乙醚液2~5ml，至于比色管内 → 在70~80℃水浴上抽干 → 立即加入1ml三氯甲烷溶解，供比色使用 5.标准曲线制备： 准确取一定量Va标夜于4~5个容量瓶内，用三氯甲烷配置标准系列 → 再取相同数量比色管顺次取1ml三氯甲烷和标准系列使用液1ml → 各管加入乙酸酐1滴，制成标准比色系列 →于620nm波长处，以三氯甲烷调节吸光度至零点 → 将标准比色系列按照顺序移入光路前，迅速加入9ml三氯化锑-三氯甲烷溶液 → 于6s内测定吸光度 → 以吸光度为纵坐标 6.样品测定 于一比色管中加入10ml三氯甲烷，加入一滴乙酸酐为空白液 →另一管 加入1ml三氯甲烷，其他比色管分别加入1ml样液及1滴乙酸酐 → 以下步骤同标准曲线制备 注意事项 （1）三氯化锑腐蚀性强，不能沾在手上，三氯化锑遇水生成白色沉淀．因此用过的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。 （2）维生素A见光易分解，整个实验应在暗处进行，防止阳光照射，或采 用 棕色玻璃避光。 三氯化锑比色法原理：样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离，以石油醚萃取后，先用正相色谱柱提取富集，用反相色谱柱，紫外检测器定量测定。 试剂： 异丙醇 、2％焦性没食子酸乙醇溶液 、75％氢氧化钾溶液 、? 石油醚 、?正己烷 、Vd标准溶液等 操作步骤： 样品处理 → 测定液的制备 → 测定 维生素E、维生素K的测定 对于维生素E、维生素K分析方法较好的是高压液相色谱法以及HPLC法。 推荐网站：/news/detail.php?id=50266 1 4 分子中仅含有碳、氢、氧三种元素 不溶于水，而溶于脂肪和大部分有机溶剂。 脂溶性维生素有相当