HPLC法测定双氢青蒿素哌喹片的含量.DOCVIP

HPLC法测定片中双氢青蒿素的不确定度朱 凯，范 琦1*，张松2，雷 健1，孙 鹏1 （1. 重庆医科大学，重庆 400016；2. 重庆市药品检验所，重庆 401121） 摘 要： 目的：分析HPLC法测定双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素含量的不确定度构成及其大小。方法：对不确定度分量进行评定，计算合成不确定度和扩展不确定度。结果：扩展不确定度U = 0.mg (k = 2)。结论：HPLC法测定双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素含量的不确定度主要来源供试品溶液色谱峰面积的不确定度。 关键词：不确定度高效液相色谱法；双氢青蒿素哌喹片；双氢青蒿素含量 中图法分类号：R927.2 不确定度是测量的重要质量特性之一[-2]。在分析测量中，不确定度评价正在成为一种常规要求[]。双氢青蒿素哌喹片为双氢青蒿素和磷酸哌喹组成的复方片剂，是一种治疗疟疾的优良药物[]。双氢青蒿素及磷酸哌喹均为中国药典（2005年版）收载[-7]。采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC）测定双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素的含量，结果准确，操作简便[]，但未见其测量不确定度的相关报道。本文对HPLC法测定双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素含量的不确定度进行分析，不确定度，为评价测定结果提高测定质量提供科学依据。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 Shimadzu LC-2010A高效液相色谱仪（包括自动进样器），SPD-M10Avp二极管阵列检测器，CLASS-VPv.6.2) 色谱工作站Mettler AE240电子分析天平。 双氢青蒿素哌喹片（重庆华立控股股份有限公司，每片含双氢青蒿素40mg、磷酸哌喹0.32g，批，双氢青蒿素对照品（中国药品生物制品检定所，含量100%，批号100184-200401），乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。 1.2 实验方法 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为Phenomenex C18250mm × 4.6mm, 5μm)，流动相为乙腈-甲醇-0.02ml·L-1硫酸铵（50:10:40，稀硫酸调pH4.8），流速1.0m·min-1，检测波长210nm，柱温30℃，进样量10μ。理论板数按双氢青蒿素α异构体峰或β异构体峰计算均不低于10000。 测定法 取双氢青蒿素哌喹片10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于双氢青蒿素20mg），置25m量瓶中，加甲醇约20m，振摇5min，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，静置30min，作为供试品溶液取双氢青蒿素对照品加甲醇制成每1m含0.8mg的溶液，静置30min，作为对照溶液。溶液各10μ注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以α异构体和β异构体的峰面积之和计算双氢青蒿素的含量。 2 测量不确定度的分析 2.1 测量不确定度的构成及相对合成标准不确定度的数学表达式 根据HPLC外标法以峰面积计算含量的基本原理，双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素含量的数学表达式为： （1） 式中，X为双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素的含量（mg/片），为HPLC法的校正因子（mg·m-1），AX为供试品溶液中双氢青蒿素的峰面积，VX为供试品溶液的体积（m），为平均片重（g/片），mX为供试品重（g）。 由（1）式可知，X的测量不确定度由彼此独立的、AX、VX、和mX的测量不确定度构成HPLC法测定双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素含量的相对合成标准不确定度、urel(AX)、urel(VX)、urel(mX) 和 共5个不确定度分量构成数学表达式为[]： （2） 2.2 不确定度分量的评定 2.2.1 HPLC法校正因子的相对标准不确定度 因为，其中CS为对照溶液中双氢青蒿素的浓度（mg·m-1），AS为对照溶液中双氢青蒿素的峰面积，则。 对照溶液浓度的相对标准不确定度urelCS) 由于，其中mS为对照品重（mg），P为对照品纯度（%），VS为对照溶液的体积（m），所以urelCS) 来源于对照品称量的相对标准不确定度urel(mS)、对照品纯度的相对标准不确定度和对照溶液体积的相对标准不确定度urelVS)。 对照品称量的相对标准不确定度urel(mS)主要来自天平的标准不确定度u1(mS)称量重复性的标准不确定度u2(mS)。天平的标准不确定度u1(mS)从天平校准证书查得，的为0.01g。按矩形分布，取包含因子，则= 5.8 × 10-3mg。称量重复性的标准不确定度u2(mS)则= × 10-2mg。对照溶液对照品2093mg，对照称量的相对标准不确定度= 9.9 × 10-4 （2）对照品纯度的